小肠IEL细胞因子流式检测

YuJianyu

  近两个月一直在做小肠上皮间淋巴细胞（IEL）细胞因子流式分析，小鼠是B6，健康自然状态，检测细胞群为CD4+IEL及CD8+IEL，细胞因子是IFN-γ，IL-17以及IL-22。在此遇到一个问题：当我用FMO做对照的时候，发现细胞因子表达阳性的细胞比例出现了问题，如图。FMO对照和实验组唯一的区别是是否加入细胞因子流式抗体（都是APC的），其他操作完全一致，上机的时候电压补偿等条件都调好，中途没有调整，但从图上看，实验组的整个population在APC通道往上升，导致圈门的时候阳性比例不合理，这么高的比例，不可能出现在健康小鼠身上。一直不知道什么原因导致了这种结果，该如何解决？
  在此求助各位站友及@niwanmao倪老师，望出手相助！

niwanmao

YuJianyu 发表于 2019-6-30 01:12
是的，我没加blocking，这是主要原因？另外FMO也没加isotype。是不是加blocking和isotype之后问题可能可 ...

Isotype不需要。
主要是Fc Blocking

niwanmao

是不是未用Fc Blocking阻断？
这个现象说明Fc受体非特异性结合占了主要。

YuJianyu

niwanmao 发表于 2019-6-29 12:14
是不是未用Fc Blocking阻断？
这个现象说明Fc受体非特异性结合占了主要。

是的，我没加blocking，这是主要原因？另外FMO也没加isotype。是不是加blocking和isotype之后问题可能可以解决了？

YuJianyu

niwanmao 发表于 2019-6-29 00:55
Isotype不需要。
主要是Fc Blocking

感谢倪老师！