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介绍一种多个样本单管获取的批量技术-barcoding

发布者: niwanmao | 发布时间: 2019-12-20 16:31| 查看数: 185| 评论数: 1|帖子模式

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样品条形码(Sample Barcoding)技术是把不同的细胞样品用各自独特的标签标记物染色,然后混合后用同样的染色方案进一步处理,并以样品混合物的形式采集,在采集后的数据里面,通过解析预先标记的标签信号,就能恢复之前各个原始样品的数据。这种条形码技术允许在流式中进行大规模、高通量、多重分析,除了提高通量,其主要的优点是不同样本的处理条件、染色条件、获取条件等均能保证一致性,既能减少样本间由于这些环境变量或技术问题引起的误差,也能减少抗体和试剂消耗。
下图就是Sample Barcoding的工作示意图。不同样本用不同的barcoding染料标记后,进行相同的处理,最后从barcoding散点图上将不同样本解析出来,分析它们对应的目标抗原表达情况。下图中的样本2明显就看到标记表达量增高。
20191220_153633.png


下图则是一个Phospho-Flow实验的荧光样品条形码的示例。 PBMC在体外用八种不同的刺激条件,再加上对照组,一共9组样本,用甲醛固定,并用冰冷的甲醇透化后,使用不同浓度的Alexa Fluor 750和/或PacificOrange琥珀酰亚胺酯(eBioscience)的组合对不同组别的细胞进行条形码编码。反应后,将每个样品洗涤后,合并到一起,接着对合并的样品进行统一的淋巴细胞标记和磷酸化STAT3染色。获取数据后,分析的时候,根据之前每个样本预标记的Alexa Fluor 750和/或PacificOrange琥珀酰亚胺酯强度,可以区分出对应于不同刺激条件的八个主要细胞群体以及对照组,将不同组的B细胞刺激后表达的pSTAT1叠加在一起,可见每个峰高度相似,说明门内细胞非常一致,并且直观地看出用IFN-α和IFN-γ处理过的B细胞中诱导表达pSTAT1信号,但在其他条件下则没有或仅有很少的诱导作用。
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Sample Barcoding技术不仅已广泛应用于人和小鼠的原代白细胞、PBMC和细胞系,而且已应用于血小板和红细胞。主要用于那些易受管与管之间差异影响的指标,分析的指标常为B细胞信号研究和其他各种细胞信号研究、研究药物对原代小鼠和人类免疫细胞亚群的作用、小鼠骨髓细胞的定位、干细胞研究以及临床免疫监测等。

编译来源:Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition). Eur. J. Immunol. 2019. 49: 1457–1973

最新评论

skeletal 发表于 2019-12-24 22:26:31
Sample Barcoding技术在RNA-SEQ中应用的比较早,在流式中使用能有效的减少误差

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