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当样本细胞数少的时候,你应该如何进行样本处理?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-1-10 19:12| 查看数: 110| 评论数: 0|帖子模式

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这个问题,曾经很多做科研的FLOWER都碰到过,尤其是做小动物的,例如做小鼠的胰腺组织,往往只能分离出不多的细胞,处理中又很容易丢掉,导致最后上机获取到的细胞寥寥无几,给结果解读带来很大困难。

因此,重要的是,如何尽量避免丢失,保障有足够的细胞进行实验呢。在Cyt-Geist中,汇总了以下建议,相信对遇到相同困境的FLOWER会有较大帮助:
1、建议从野生型或其他相同细胞来源获取细胞掺入进去。如果感兴趣的细胞标记了荧光蛋白,那么可以使用没有荧光蛋白标记的野生型细胞来增加细胞数量,这样既可以区分出感兴趣的细胞,又使分析过程中的细胞损失降至最低。因为细胞丢失率是一定的,当细胞总量增加后,尽管你的目标细胞比例减少了,但是丢失的绝对数也相应减少。

2、建议使用细胞系进行实验。在某些研究中,可以使用从感兴趣细胞建立的细胞系,这些细胞可以代替感兴趣的细胞来建立电压和设门等条件,这样可以大大减少样本的消耗,实现样本最大价值。

3、与血液不同,来自实体器官的原代细胞在用于流式分析之前,必须经过数个涉及机械和酶解等步骤。由于这些解离步骤,细胞完整性可能受到损害。为了保证样品质量和细胞数量,需要关注解剖手法和解离方案的优化。除了优化解离程序外,还应优化整个实验中使用的温度条件。建议使用目标细胞优化这些条件,或者至少使用与目标细胞相似的细胞(即衍生细胞系)。优化条件和方案可以更好地解离细胞,并将解离时间最小化,从而保持细胞完整性。

4、为了使细胞在准备步骤中保持“happy”和活性,建议使用无血清培养基,而不是常规使用的磷酸盐缓冲液(PBS)。应确保所使用的缓冲液不含酚红,否则可能干扰分析。另外,应考虑用于优化缓冲液,例如HEPES缓冲液在室温下的pH值优于磷酸盐缓冲液,这使其成为流式细胞术样品制备的理想选择。
相信按照上述建议,各位做小动物流式的FLOWER,能够得到满意的结果。

参考文献:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/cyto.a.23941



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