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流式细胞仪CS&T报告怎么看?出问题了如何解决?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-2-10 20:32| 查看数: 92| 评论数: 0|帖子模式

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基于微球的质量评估系统是衡量流式细胞仪总体“健康”与否的金标准,因为微球上的荧光长时间可重现。 BD在2000年中期开发了一种较为常见的基于微球的系统:Cytometer设置和跟踪(CS&T)微球。它们是用荧光染料混合物染色的聚苯乙烯微球,以不同的强度(bright/mid/dim)在所有通道中发出荧光。当与CS&T软件(在FACSDiva内调用)搭配时,可轻松进行日常流式细胞仪仪器质控,自动监控仪器性能。这里肯定会有FLOWER问,我不是BD的机器,没有CS&T软件,怎么做仪器QA(Quality assurance)呢?在没有CS&T软件的仪器上,可以使用其他标准微球,包括rainbow beads、8-Peak Beads等,具体步骤以后再发。今天先谈CS&T。


跑CS&T很简单,启动CS&T软件之后,将一滴CS&T微球稀释后上机,后面就交给软件了,详细内容参见:https://www.bdbiosciences.com/documents/webinar_2010_09_facsdiva.pdf


对于每个通道,软件将记录到的参数与参考值(即基准)进行比较。如果每日值落在建议的范围内,则性能将通过。如果这些值超出范围但仍在允许的范围内,则会出现警告。如果值超出容许范围,则性能控制将失败。


那么,每个指标是什么含义呢?

  • PMTV:指的是PMT电压,根据CS&T算法计算得到,软件会计算要调整到相同的MFI,需要调整多少PMT电压,如果调整值ΔPMTV超过50V,那么就说明性能失控。
  • Actual target value:微球每天的MFI值。
  • %rCV: 指的是robust CV,是一种计算CV的替代方法,该CV对异常值的敏感性低于CV。 理想情况下,rCV应该在3左右。
  • Optical Background (Br):从光路收集的噪声。 背景噪声越多,Br越高。 因此,低的Br可提高分辨率。
  • Detector efficiency (Qr):指的是每个荧光分子检测到的光电子数。 Qr越高,分辨率越高。
  • Laser delay:由于激光器在物理上是分开的,因此微球会在不同时间经过激光束,而来自单个事件的数据将被一起处理。 这些延迟取决于特定的鞘液压力。


有时,流式细胞仪的CS&T性能控制会失败,表明需要关注流式细胞仪了,必要时寻求厂家工程师帮助。

在寻求帮助之前,先通过以下措施自行排查,必要时再叫工程师:

1、准备新批次的微球。 因为通不过QA有可能是原来的微球过期了、太稀了或已被光漂白了,并且不要忘记在使用前将微球充分混合,并始终以低速运行,确保单个微球逐一通过。

2、检测鞘液过滤器和管路中是否存在气泡。 如有必要,可以按照仪器指南清除气泡。

3、如果还是不行可以按下表,找到最常见的故障原因以及解决方法。 这张列表不一定很全,只能囊括一些最常见的原因。

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信源:https://bitesizebio.com/46384/the-cst-report-its-troubles-and-how-to-fix-them/

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