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一个案例,用流式快速分析腹膜透析患者是否发生感染

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-2-12 21:49| 查看数: 34| 评论数: 0|帖子模式

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如果没有有效的抗菌疗法,腹膜透析(PD)相关的腹膜炎就可能会迅速危及生命。 然而,这些病例常规使用基于培养的微生物学检查,所以很少能快速给临床医生提供指导,从而导致临床上一般都用广谱抗生素覆盖。而且,有些腹透中心的培养阴性腹膜炎发生率接近20%。这两个现状的存在,说明需要有新的方法来使临床医生及时做出决策,来改善患者的预后。
PCR方法检测病原菌,在PD排出液上效果较差,这可能是由于存在抑制因素,例如纤维蛋白和降解的DNA。
澳大利亚的Kieran T. Mulroney于2020年2月6日在Peritoneal Dialysis International: Journal of the International Society for Peritoneal Dialysis杂志上发表了一个案例,展示了流式的威力,在收到样品后2小时内对细菌、人白细胞和其他临床相关颗粒进行了检测和计数。
案例里面的这名老年男性长期腹透,因腹部疼痛、发烧、腹透排出液浑浊而入院,近期曾因芽孢杆菌引起的腹膜炎而被送往当地一家三级医院的急诊科。 所以此次入院之后,临床医生就凭经验腹膜内注射万古霉素和庆大霉素,而未收集任何样品进行培养。 用药后,才又引流了一袋排出液,送往实验室进行显微镜检查、培养和敏感性(MC&S)检查,并告知实验室已经使用了抗生素。因此,排出液同时还进行了流式细胞术检测。

流式步骤
将排出液倒入2个50 mL 无菌Falcon离心管中,分别以200x g、400x g和9000x g离心三次,依次去除肉眼可见的纤维蛋白沉积物、离心出人白细胞、沉淀细菌。 将白细胞重悬在预热的(37°C)DMEM培养基中,将细菌重悬于37度预热的Mueller-Hinton Broth [MHB]培养基。两种培养基中均含20%v / v胎牛血清(FCS)。
白细胞管,用0.1μm过滤的Hank平衡盐溶液(HBSS)洗涤,接着与Mouse Anti-Human CD45 APC-H7孵育30分钟,洗涤,用10μM SYTO9染色10分钟,然后上机分析。
细菌管用0.1μm过滤的HBSS洗涤后,用10μM SYTO9和2μL/mL Fixable Live/DEAD NearIR(FNIR)染色30分钟,然后上机分析。

流式图形
首先是分析白细胞管,可以看出白细胞虽然少,但还是比较明显的分群:
20200212_213752.jpg

在细菌管,按照前述门的位置排除掉右上的白细胞之后,对细菌进行分析,计数SYTO9+的细菌,即可得到细菌数量为1.21×10E6/ml。
20200212_214242.jpg

这样漂亮而直观的结果,只需要2个小时就能完成。虽然不能告诉临床医生具体什么细菌,但是在第一时间给了临床医生一个用抗生素的依据。
参考文献链接:https://journals.sagepub.com/doi/full/10.3747/pdi.2017.00231

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