同型对照和FMO对照？

我敲爱吃鱼

各位大佬们，在多色荧光中，例如要检测CD4+CD25+Treg中某一蛋白的表达，染了CD4和CD25和目标蛋白IgG对照的  and  只染了CD4CD25的FMO有什么不一样吗？用哪个设门比较合适   
检测胞内蛋白，但是表达量一般，呈现方式只能以直方图的叠加的形式吗？因为破膜峰有点偏移   散点图直接圈有没有说服力

niwanmao

FMO主要是在多色流式中体现荧光渗漏，所以在Fc结合不是主要背景的多色流式中，优先用FMO。

如果用了FMO之后，发现背景依然很高，那么就说明你实验中的细胞背景很明显，需要加Fc受体阻断后再染FMO。

你说的第一种对照，应该是FMO＋同型，这是杂志比较容易接受的对照。

表达量没出来，你得首先确认是否真实？如果是因为你破膜没破好或者抗体质量问题造成没出来，那结果就是错误的。如果确实是真的，那么建议用平均荧光强度来反映最好。

zengyikaren

根据这里的说法，FMO才应该是用于阳性判断的依据。Isotype 用于判断是否有背景结合，毕竟背景结合很强的情况下，FMO也就没有意义了。下面这张图红色的圈里面就是根据FMO圈出的阳性区域。

参考资料：
https://expert.cheekyscientist.com/how-to-design-execute-and-analyze-a-modern-flow-cytometry-experiment-part-3-tiw8c/?utm_source=Infusionsoft&utm_medium=Email&utm_campaign=Exindocvideo3