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OMIP-62:14色16抗体分析小体积人全血和儿童呼吸道样本

发布者: zengyikaren | 发布时间: 2020-2-23 15:16| 查看数: 232| 评论数: 0|帖子模式

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生命早期免疫系统的不成熟,使婴儿容易感染传染病,尤其是胃肠道和呼吸道疾病。根据世界卫生组织的资料,急性下呼吸道感染是全球儿童死亡和住院的主要原因。免疫系统如何在生命早期发育成熟,目前尚未完全了解。更好地了解婴儿对感染的免疫和炎症反应的性质,以及为什么某些婴儿患上疾病,可能有助于确定新的临床生物标志物、治疗方法和预防方法。



新生儿和小儿免疫学领域的主要障碍之一是获取相关样本,这受到可采样本数量和体积的限制。因此,我们对婴儿细胞免疫的大部分理解,只能来自脐带血的研究,而对于更成熟的婴儿的免疫力知之甚少,对黏膜部位(如肺)的感染免疫力知之甚少。而且,在健康的婴儿中,使用侵入性程序来获得下呼吸道样本的方法是不合理的。因此,需要开发出有助于分析小批量和少细胞样品,尤其是采样受限的感染部位的免疫应答的技术。



本14色方案利用300ul成人外周血进行了方案优化,包括样本处理方式摸索,抗体滴度和染色指数测试,不同抗体克隆号测试,电压、补偿调节等,然后在脐带血,婴幼儿气管内抽吸物,鼻腔抽吸物样本中应用,可以鉴定其中ILC细胞(ILC1,ILC2,ILC3),NK 细胞,粒细胞(中性粒和嗜酸性细胞),T细胞,粘膜相关恒定T细胞(MAIT)和NKT-like主要细胞群体。本方案广泛应用于婴幼儿的小体积或少量细胞样本的固有免疫和适应性免疫反应临床研究,在儿科疾病中具有诊断和监测价值。


方案设计:

Panel design

Panel design

画门策略:

Gating illustration

Gating illustration

人全血画门示意图:

Aldult whole blood

Aldult whole blood

儿童鼻咽抽吸物画门示意图:

Pediatric nasopharyngeal aspirate

Pediatric nasopharyngeal aspirate

样本处理流程摸索(红框中为最终选择的流程):

人外周血处理方式

人外周血处理方式

呼吸道组织处理方式

呼吸道组织处理方式



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