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临床流式应使用哪些阴性对照?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-3-19 21:01| 查看数: 147| 评论数: 0|帖子模式

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临床流式细胞仪问世之后,同型对照开始用于临床检测中,到现在仍有许多实验室每天使用。但是,由于目前在临床流动实验室中几乎使用的都是直接偶联的单克隆抗体,在大多数情况下,FDA不建议使用同型对照。
理想情况下,流式细胞术的阴性对照应该是相同细胞类型的细胞,并且以相同的方式处理、用相同的抗体(减去要分析的目的抗体)染色,也就是FMO对照(荧光减一)。在FMO方法中,将细胞与试管中存在的所有抗体(所要分析的抗体除外)以相同的方式进行处理和染色。对于多色方案中的每一种抗体,常规使用FMO方法都是成本过高的。
同型对照是指与目的抗体的免疫球蛋白类别相同、荧光染料相同、单抗浓度相同的对照抗体,但是在过去的20年中,流式细胞学界对同型对照在检测中反映非特异性结合水平的准确性存在很多争论。

通过流式专家的共识,发现将用同一管样本内部的细胞群体用作阴性对照,是确定特异性抗体非特异性结合的最合适方法。因为这些细胞从一开始就是实验的一部分,处理和染色的所有步骤都相同。举个例子,对淋巴细胞群中的CD20和CD3染色时,由于淋巴细胞中同时存在每种抗体均为阴性的细胞,所以可以直接用CD20阴性的淋巴细胞作为CD20阳性细胞的阴性对照,同样,CD3阴性细胞可作为CD3阳性细胞的阴性对照。
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此外,这种内对照还可以跨不同管使用,只要抗体染料相同并且抗体同种型一样(IgG1/IgG2a/IgG2b等)。
未染色的细胞,通常只是用于评估细胞自发荧光。

当然,在临床实验中,有些情况下可能会继续使用同型对照,例如:细胞内染色、定量分析、罕见事件分析等。但是,在同型对照的选择上,需特别关注其与目的抗体的浓度、同种型、荧光染料的匹配。

进一步阅读:
1. Hulspas R, O’Gorman MRG, Wood BL, Gratama JW, Sutherland DR (2009) Considerations for the control of background fluorescence in clinical flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom. 76:355-364.
2. Keeney M, Gratama JW, Chin-Yee IH, Sutherland DR (1998) Isotype controls in the analysis of lymphocytes and CD34+ stem and progenitor cells by flow cytometry - time to let go! Cytometry. 34:280-283.
3. Roederer M (2002) Compensation in flow cytometry. Curr Protoc Cytom. 22:1.14.1-1.14.20.

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