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同型对照:该放弃了吗?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-4-14 14:48| 查看数: 239| 评论数: 2|帖子模式

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关于是不是要用同型对照,几十年下来,争议不断,这不,1999年这篇文章,还是值得我们再回头看看的。任何优点和缺点,都是在特定情况下的。

Keeney等人在《Isotype controls in the analysis of lymphocytes and CD34+ stem and progenitor cells by flow cytometry--time to let go!》中认为在计数CD34阳性干细胞,同种型对照没什么用处,实际上,在其它稀有事件分析的例子中,同种型对照确实用处也不大。同种型对照具有局限性,在Keeney的观点中得到了扩展,因为同型对照的作用,都可通过一些其他试剂、工具或先进的设门策略替代。 但是,O'Gorman在1999年写了篇Comment,提供了一些示例,认为有某些情况下,同型对照有用且确实值得推荐。

同型对照的缺陷
理论上,同型对照是作为“阴性对照”,即衡量的是抗体染色时的背景荧光或非特异性荧光。在理想情况下,根据同型对照设门,可以将同型对照以外的信号确定为目标抗体的特异性染色。不幸的是,同型对照并不是完美的阴性对照。原因如下:

(1)单克隆抗体是转化的杂交瘤细胞分泌的蛋白,因此尽管同型对照和目标抗体的免疫球蛋白的亚类可以匹配,但仍会存在细微的差异,因为这些杂交瘤不是正常细胞。

(2)尽管纯化、结合和再纯化单克隆抗体的程序已得到显著改善,但各批次之间或各公司之间的程序并不完全一致。

(3)即使免疫球蛋白亚类匹配、F/P比和浓度均一致,同型对照的背景结合能力可能仍然存在差异。

但是,O'Gorman认为,如果在了解了这些限制的情况下使用它们,那么它们可能会特别有用,并且对同型对照可以提供的信息不会有不切实际的期望。

同型对照值得应用的场景
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最新评论

Veblen 发表于 2020-4-15 21:24:41
F/P比是指什么
niwanmao 发表于 2020-4-16 14:02:25

荧光素 /蛋白 比

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