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OMIP-064:单管27色方案检测人NK和其它固有淋巴细胞、MAIT等

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-5-18 18:47| 查看数: 102| 评论数: 0|帖子模式

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疟疾仍然是一个重要的健康威胁,每年约2亿病例,约40万人死亡,其中大多数是5岁以下的儿童(1-3岁)。该疾病是由蚊子传播的疟原虫引起的,疟原虫具有复杂的生命周期,可感染身体的多个部位,包括肝脏和血液。尽管设计有效的抗疟疾疫苗的努力已经进行了近一个世纪,但仍然没有任何疫苗能够赋予人体足够持久的免疫力。此外,尽管反复感染,但人体对疟疾自然产生的杀菌免疫力却很少。辐射减弱的孢子(RAS)保留了其感染肝脏能力,已被证明具有杀菌保护作用。但是,对该保护机制的理解还不完全。
值得注意的是,自然感染的发生似乎抑制了保护性杀菌免疫的发展,因为非流行地区的临床试验均发现,其疫苗接种效果反而要好于疟疾流行地区。有人提出,致耐受性反应、免疫力耗竭和衰老起一定作用。识别抗疟疾免疫力的基本免疫机制或缺乏抗疟疾免疫力的机制将有助于开发适合大规模分布的保护性疫苗。高参数多色流式细胞仪能够全面表征针对病原体的免疫反应。
因此,Hertoghs N等人研发了一管27色固有免疫方案,旨在检测与疟疾实验疫苗试验中保护作用相关的免疫应答,此外还比较了疟疾流行地区和非流行地区的个体的应答。该方案和其它两个针对T和B的方案一起,就可以充分理解由RAS免疫触发的免疫应答。
方案组成
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设门步骤
第一步,前三个仍然是常规的圈液流稳定区域、排除粘连体、排除死细胞,接着根据CD14/SSC,圈出CD14-的淋巴细胞和剩余的单核细胞,然后单核细胞再根据CD14/CD16圈出单核细胞三个亚群(这三个门我有点纳闷,经典单核、中间型单核、非经典单核貌似不是这么圈的,不知道为什么文章里面这样圈?)。CD14-淋巴细胞,再在CD19/CD33图上,排除掉B细胞和粒细胞/干扰之后,剩余的再以FSC/SSC进一步纯化,得到非B的淋巴细胞。
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第二步,前面得到的非B淋巴细胞,通过CD3,分出CD3+和CD3-两部分。
CD3+部分以CD161/TCRVα7.2,分出双阳性的MAIT,剩余部分在TCRγδ和TCRVδ2,分出三个γδT亚群。
而CD3-部分,通过排除CD16+细胞,得到的非B、非T、非NK细胞,圈出CD127+ 的ILC,而ILC进一步通过CRTH2/cKit分出双阴性的ILC1、CRTH2+的ILC2、ckit单阳的ILC3。
CD3-部分还可通过CD56/CD16分出三个NK亚群:CD56dimCD16+ NK(主要)、CD56highCD16+NK、CD56high CD16-NK。总NK还可根据CD57、NKG2A、NKG2C,分出CD57+NKG2A-NKG2C+的适应性NK亚群。
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γδT的NKG2D、NKG2A、CD27的表达:
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NK三个亚群的NKG2C、CD57、NKp30、FcεRIy、NKp46的表达
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CD3+T细胞,根据CD56表达与否,分出纯T和CD56+CD3+T(其中含NKT),其HLA-DR、CD4、CD8的分布是不同的:
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CD19-淋巴细胞,圈出Ki67+群体,然后看这些增殖活跃的淋巴细胞在CD3、NKG2C、CD27、CRTH2上的分布。
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大概简单介绍了上述设门过程,相信对各个固有免疫亚群的性质大概有了了解吧。

信源:Hertoghs N, Schwedhelm KV, Stuart KD, McElrath MJ, De Rosa SC. OMIP-064: A 27-Color Flow Cytometry Panel to Detect and Characterize Human NK Cells and Other Innate Lymphoid Cell Subsets, MAIT Cells, and γδ T Cells [published online ahead of print, 2020 May 16]. Cytometry A. 2020;10.1002/cyto.a.24031. doi:10.1002/cyto.a.24031

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