流式中文网 门户 查看主题

当CFSE测细胞增殖出现单峰左移,不要怀疑自己

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-9-24 16:13| 查看数: 620| 评论数: 14|帖子模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?加入流式中文网

x
流式中文网一直以来,是流式爱好者的网上家园,我们不为名、不为利,只为一个干净、纯粹的技术交流场所。正是如此,精彩的内容时不时会出现。
我们的老站友,浙江大学邵逸夫医院沈筱芸老师,昨天给我发来一段微信,希望分享一段关于CFSE染色的经验,让各位研究生能够少走些弯路,顺利做完实验,在此表示非常感谢。
这段经验其实很简单,CFSE我们通常希望能够跑出漂亮的多峰图形,父代 ~ 子代,一代代的都分隔清楚(参见https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2370-1-1.html),但是不少FLOWER做的都是肿瘤细胞,结果同样CFSE染色,愣是跑不出多峰图,做到最后,让人怀疑人生。

按照沈筱芸老师的经验,她们做了很多肿瘤细胞,都是如此,最后发现有文献研究了此现象的机制,怀疑与肿瘤细胞主动外排染料导致:
20200923_160031.jpg 20200923_160041.jpg


从文献中的图看,虽然没有形成多峰,但是CFSE荧光强度还是能与分裂代数形成一定的线性关系:
20200923_165502.jpg


相关文献及其附件附于此,在做肿瘤细胞CFSE增殖实验的FLOWER们可下载参考:
细胞增殖实验.pdf (648.37 KB, 下载次数: 85)

评分

参与人数 1流星 +1 收起 理由
chaoslure + 1 感谢分享

查看全部评分

最新评论

侯效林 发表于 2020-9-24 17:01:55
感谢沈筱芸老师和倪老师,正是你们的经验分享使我们少走了很多弯路,再次感谢!
南瓜妹妹 发表于 2020-9-26 10:58:09
很好的实验经验分享,谢谢各位老师的分享!
qyj2017 发表于 2020-10-1 17:02:39
很好奇标准的CFSE量化统计应该怎么做?是图上的那种线性拟合折线图吗
niwanmao 发表于 2020-10-1 19:22:34
qyj2017 发表于 2020-10-1 17:02
很好奇标准的CFSE量化统计应该怎么做?是图上的那种线性拟合折线图吗

Modfit软件里面,有标准的程序化自动拟合。
btx362237729 发表于 2020-10-9 14:31:36
感谢分享
Veblen 发表于 2020-10-9 22:35:13
老师,您好coculture那个图没太看懂,是指细胞从母代开始同步增殖对吧,既然同步增殖,在某个时间点就应该只有某一代的细胞,那为什么我看DAY2 DAY3 DAY4里面怎么会有好几个峰呢?同时这几个峰荧光强度还不呈现2倍关系。请老师讲解一下怎么看图哈,谢谢
niwanmao 发表于 2020-10-10 10:23:40
Veblen 发表于 2020-10-9 22:35
老师,您好coculture那个图没太看懂,是指细胞从母代开始同步增殖对吧,既然同步增殖,在某个时间点就应该 ...

不同的细胞系,增殖速度会不同,而且同一时间点,可能有一代,也可能两代。荧光强度不是2倍,不能用细胞周期的思维来推,因为CFSE并不是对半分的。
Veblen 发表于 2020-10-11 17:36:24
niwanmao 发表于 2020-10-10 10:23
不同的细胞系,增殖速度会不同,而且同一时间点,可能有一代,也可能两代。荧光强度不是2倍,不能用细胞 ...

那我可不可以这样理解,基本上只有T细胞才能出现荧光强度呈2倍变化的增殖峰?
niwanmao 发表于 2020-10-11 20:29:50
Veblen 发表于 2020-10-11 17:36
那我可不可以这样理解,基本上只有T细胞才能出现荧光强度呈2倍变化的增殖峰? ...

不好意思,我前面说错了,是均分到子代。只是因为用LOG坐标,所以看不出类似周期那样减半的分布,但是代数之间能够分开。只是在淋巴细胞上面由于父代存在时间长,所以各代之间分隔比较明显。而前面这些肿瘤细胞系,却分裂速度快,所以父代很快就没,大家几乎同步进入下一代,所以形成逐步左移的现象。
12下一页
关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2020-12-2 10:47

Powered by Discuz! X3.4

© 2001-2013 Comsenz Inc.