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「指南」全血血小板多色流式评估的方案设计、优化

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-9-28 17:10| 查看数: 225| 评论数: 1|帖子模式

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流式细胞仪是一种精密的分析技术,可以用来精确评价血小板的表型和功能。流式细胞术现已开始应用于遗传性血小板疾病的临床研究。

全血血小板分析技术与其他血小板分析技术(如光透射聚集法)相比,具有一定的优势,因为光透射聚集法需要的样本量大,灵敏度有限。这一点在小儿群体中尤为重要。此外,与富含血小板的血浆(PRP)相比,使用全血具有优势,因为样本处理量极少,可减少分析前的变异,对医院实验室来说更可行。

多色流式细胞术是一种有吸引力的技术,用于表征血小板及其受体表型。除了测量单个血小板表面标志物的表达外,还可以使用流式细胞仪测量血小板功能,包括促凝血小板的形成、血小板的磷流、血小板钙通量和单核细胞-血小板聚集物的形成。这些测定需要不同的条件,应分别设计和优化。

2020年10月份将正式发表的这份指南重点谈的是全血中的血小板表面标志物。开发流式方案的过程是一项重要的工作,在设计、优化、故障诊断和验证时需专门针对血小板的检测考虑。值得做血小板表型和功能检测的FLOWER参考。
guideline.pdf (1.17 MB, 下载次数: 28, 售价: 1 流星)

最新评论

lizhiyu 发表于 2020-10-24 16:01:40
倪老师您好! 我现在正好在做血小板活化的流式,有几个问题想咨询下您。
我用的是最常见的BD的血小板活化的Protocol https://www.bdbiosciences.com/en ... platelet-activation
主要是三种颜色:FITC PAC-1; PE CD62P ; APC CD61。  用CD61圈血小板门后,看门内PAC-1和CD62p的阳性情况

问题:由于我做的是不对血小板进行额外刺激的检测,对比患者和健康人血小板活化的差异,因此CD62p的阳性率本来就不是很高,不会像用ADP刺激后那么明显。然后现在的问题就是PE IgG(使用的是CD62p说明书上推荐的货号)的同型对照总是比CD62p的阳性率更高,即使在IgG只加一半量的情况下也是如此(我按照说明书都是各加20ul)。

我之前看了论坛里的文章,包括我们实验室做别的细胞的也有许多人有类似问题。另外看到倪老师之前有发文章讲到同型对照的不可靠。因此我想问一下,在加FC block的前提下,可否不实用同型对照,而使用FMO对照(即CD61 APC+ PAFC-1 FITC)作为PE CD62p的阴性对照呢?
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