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流式检测DNA合成——BrdU掺入试验详解

发布者: niwanmao | 发布时间: 2020-11-16 16:21| 查看数: 86| 评论数: 0|帖子模式

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类似于3H-胸腺嘧啶核苷掺入的增殖检测,细胞分裂可以通过使用5溴-2'-脱氧尿苷(BrdU)(一种合成胸腺嘧啶类似物)的FCM进行监测。

为此,BrdU被掺入到新合成的复制细胞的DNA中(在细胞周期的S期),并用BrdU的特异性结合抗体检测其掺入情况。 抗体的结合需要DNA的变性,通常是通过将细胞暴露在酸或热中来实现的。 BrdU的测量通常与活性染料和/或细胞周期染色一起进行。

尽管这看起来是一种简单的分析方法,但基于BrdU的细胞分裂检测的样品制备和DNA变性必须仔细进行,因为处理不到位会导致信号偏弱,而过度处理会影响DNA和产生的信号。 样品需要充分洗涤(至少三次),因为任何残留盐酸都会破坏检测抗体。 此外,BrdU即使在4°C下也不稳定,因此必须新鲜使用。
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