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Veblen 发表于 2023-4-22 23:45 用预冷的乙醇,可减少细胞之间的粘连。 拟合算法,大多用watson。 |
倪老师,这个视频操作讲的比较详细了,但是实验步骤,尤其是乙醇固定穿孔的时间只用了冰上15min,是不是跟我之前做的4℃(2h-过夜)差异比较大啊。@niwanmao |
lulixian669 发表于 2021-2-23 21:14 这个15分钟,如果操作得当,也是染的出来的,乙醇的破膜能力还是不错的。但是保险起见,4度24小时,当然最好。 |
lulixian669 发表于 2021-2-23 21:14 这个视频应该是多年以前的了,操作太复杂。在周期分析中,乙醇的作用不仅是破膜,更重要的作用是把DNA从组蛋白中沉淀出来,以便PI充分嵌入。 |
tiger 发表于 2021-2-24 15:51 感谢您的补充。 视频我看上面的发布日期是2020年10月份的。 乙醇对提取出来的核酸是有沉淀作用,不过我个人的理解是,乙醇作用在完整细胞上,应该主要是破膜和「蛋白质变性使核酸染料易于结合DNA双螺旋结构」。 |
乙醇处理之后会有很多像絮状物类似的东西贴在管壁上,按1500rpm*5min,依然离心不下去。这时候用枪去吸走上清,会把一部分这个东西吸走,这一部分是DNA吗?弃走对后续染色的结果影响大不大呀? |
tiger 发表于 2021-2-26 16:37 多谢!! |
niwanmao 发表于 2021-2-24 08:55 谢倪老师,因为之前做的时候都是用的隔夜,效果挺好,就是想着能节约时间,看来还是保证效果优先。 |
问下你用了这种固定的方法了吗? |
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