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[标本处理] 小鼠肺组织和外周血MDSC检测的几个问题

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 楼主| 发表于 2022-4-19 14:32:46 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
老师们好,最近我想做小鼠肺、脾、外周血的MDSCs流式,有几个问题搞不明白了,想请教大家。
1.外周血处理,需要加淋巴细胞分离液离心分离后,取PBMC吗?是否可以不离心,直接裂红液后加抗体孵育上机?两者哪个更好一些?
2.之前肺组织做过一次预实验,没有加CD45。查了查资料,发现脾和外周血可以不用加CD45标记,如果是肺则需要加CD45,是这样吗?但是看文献测肺组织的MDSC,有的加了CD45,有的没加,现在不知道怎么办好了。
3.CD11b ly6g ly6c (cd45)这样标记应该是正确的吧?能否把ly6g+和ly6c+两组亚群相加,得出来总得MDSC数量?

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发表于 2022-4-19 15:16:06 | 显示全部楼层
1、建议分离单个核细胞,这样结合了密度,会更准确确认PMN-MDSC,详见:如何将中性粒细胞和PMN-MDSCs分开?
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-9549-1-1.html
(出处: 流式中文网)

2、加CD45会好一些,可以避免一些实体组织细胞的干扰。
3、CD11b+Ly6G+Ly6Clow,如有条件加上CD115 和 CD244(同样参考第1点的帖子)。

以上仅作为不成熟的理论参考,欢迎其它做小鼠MDSC的FLOWER补充。
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发表于 2022-5-13 18:26:46 | 显示全部楼层
说一下我的见解:肺脏单细胞悬液如果做的好的话,其实白细胞率已经非常高了,并且淋巴和粒细胞分的非常清楚。但是如果做的效果不好,在经费允许和有多余通道得时候,还是需要加入CD45的,毕竟肺脏不是免疫器官。  其次就是关于你想检测总MDSC,实际上只需要加入Gr-1这个抗体就好,Gr-1包括了6C和6G
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发表于 2022-6-22 10:01:41 | 显示全部楼层
半年y 发表于 2022-5-13 18:26
说一下我的见解:肺脏单细胞悬液如果做的好的话,其实白细胞率已经非常高了,并且淋巴和粒细胞分的非常清楚 ...

请问,肺单细胞悬液制备,您用的方法是啥,我最近做了一次,肺灌流离体切碎后,用胶原酶I (终浓度1mg/ml) 37℃ 200rpm 消化1h,结果显微镜下计数时发现,细胞成团,感觉是死了。不知道是不是有些条件需要调整
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