细胞分离

• 浸泡在HBSS（或PBS）中机械解离脾脏、淋巴结（LNs）等。
• 通过轻轻破坏组织并经70 μm过滤器过滤，形成单细胞悬液。
• 推荐：可以使用红细胞裂解（配方在流式中文网站内搜）对脾脏样本进行红细胞裂解。
• 在流式缓冲液（一般是含0.2％BSA的PBS）中重悬细胞并计数。
  

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半年y 发表于 2022-5-14 20:43
学到了，实际上B220和CXCR5有很大比例的双阳，例如Biolegend官网对于CXCR5抗体的染色图，我自己也做过二者 ...

但是CXCR5的分群效果其实并不好，不会像这个文章中有一个这么明显的双阳，经常会两个峰分不开，好像是因为趋化因子受体容易收到操作影响

学到了，实际上B220和CXCR5有很大比例的双阳，例如Biolegend官网对于CXCR5抗体的染色图，我自己也做过二者双染，阳性率非常高，的确需要排除B细胞。同时我通常把Treg和Tfh做在一个配伍里，选择Foxp3-的细胞设门，可以去除Tfr细胞

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倪老师 你好 我想请教下这里CXCR5单独用10%RPMI体系的抗体来染的主要原因是啥

Climber 发表于 2022-5-27 21:34
倪老师 你好 我想请教下这里CXCR5单独用10%RPMI体系的抗体来染的主要原因是啥 ...

趋化因子受体容易受到细胞状态和固定等操作的影响，所以推荐保持细胞良好活力的时候，先染好。

niwanmao 发表于 2022-5-28 14:17
趋化因子受体容易受到细胞状态和固定等操作的影响，所以推荐保持细胞良好活力的时候，先染好。 ...

谢谢解答

积分不够看不到，不过在其他地方看到了倪老师的内容，这里想问下，选择CD44+的原因是什么呢，感谢，还有CD4+不是可以排除B细胞吗，为什么还要标记B220-

不爱吃茄子 发表于 2023-3-22 19:53
积分不够看不到，不过在其他地方看到了倪老师的内容，这里想问下，选择CD44+的原因是什么呢，感谢，还有CD4 ...

CD44和CD62L是小鼠区分TN、TCM、TEM的分群标志，Tfh属于非TN细胞，故需将CD44阴性的TN排除掉（虽然图中CXCR5+CD44-部分比较少，但毕竟有干扰）。

至于B220的排除，2楼站友也提到了，主要是彻底去掉B细胞（粘附造成的假阳）。

niwanmao 发表于 2023-3-23 07:36
CD44和CD62L是小鼠区分TN、TCM、TEM的分群标志，Tfh属于非TN细胞，故需将CD44阴性的TN排除掉（虽然图中CX ...

倪老师好，还想问下是不是也可以用CD62L+来排除TN细胞，如果可以的话和CD44-选哪个比较好呢，谢谢