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[细胞因子检测] Th1/17检测中PMA刺激,IL-17A检测不到

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 楼主| 发表于 2022-6-25 15:26:09 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
在检测Th1/17中,使用PIB对PBMC细胞(单采血采集后分离的PBMC)进行刺激。
已经对PIB中的浓度以及PIB刺激时间进行过测试。
各种方法尝试后,IL-17A均无表达。
请问有没有老师遇到过这样的情况,是由于什么问题导致的呢?对于PBMC刺激,检测Th17有什么好的解决方式么?

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发表于 2022-6-25 19:55:22 | 显示全部楼层
如果确定刺激条件没有问题,那么可能性最大的就在于染色上面,可能是抗体,也可能是破膜剂。
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 楼主| 发表于 2022-6-26 09:34:03 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-6-25 19:55
如果确定刺激条件没有问题,那么可能性最大的就在于染色上面,可能是抗体,也可能是破膜剂。 ...

倪老师,实验中Th1和Th17是在一个panel中一起规定破膜的,Th1是检测到的,那说明破膜条件应该是ok的。抗体的话,是抗体量的问题么?但是抗体我已经是厂家推荐的最高量了。
想问一下 样本本身PBMC经过冻存后会不会对Th17的表达有很大的影响
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发表于 2022-6-26 17:04:03 | 显示全部楼层
无知的牧羊人 发表于 2022-6-26 09:34
倪老师,实验中Th1和Th17是在一个panel中一起规定破膜的,Th1是检测到的,那说明破膜条件应该是ok的。抗 ...

抗体量并非越多越好,而是有一个范围。
Th1你所能测的到,不知道表达率、分群是否正常?尽量能放图上来讨论吧。
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 楼主| 发表于 2022-6-28 16:46:03 | 显示全部楼层
请见附图
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发表于 2022-6-28 20:38:05 | 显示全部楼层

VioGreen和VioBlue补偿如何?是否在排除VioGreen的时候,把VioBlue阳性的信号排除掉了?
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