CFSE检测T细胞增殖无子代峰

cczxgysl

想请教老师一个问题，我用CFSE检测脾脏T细胞的增殖能力。先用CD3抗体37度包被98孔板3h，脾脏细胞裂红后染CFSE，加到96孔板，用CD28 IL2刺激72h后上机检测。上机的细胞活性大概是50%-60%.
这是染了死活后的CD45+CD8+圈门下的情况，请问是不是没有增殖峰?
黄色为未染CFSE样本，蓝色为未刺激的CFSE样本，红色为刺激后的CFSE样本

niwanmao

站内的CFSE帖子都看过了吗？

cczxgysl

niwanmao 发表于 2022-7-28 19:42
站内的CFSE帖子都看过了吗？

看过了老师，做之前每条帖子都看过好几遍，浓度也都是参照帖子和相关文献的，不知道是哪里出了问题。CFSE浓度做了0.5和1的，cd3是1ug/ml，cd28是5ug/ml，IL-2是10IU

niwanmao

cczxgysl 发表于 2022-7-28 21:37
看过了老师，做之前每条帖子都看过好几遍，浓度也都是参照帖子和相关文献的，不知道是哪里出了问题。 ...

如果CFSE浓度没问题，那么是否要从刺激方面去想办法，是否目前这个刺激方式效果不好，我记得是不是CD3/CD28 beads刺激更好一些？

Climber

CD3扣板和CD28游离的刺激方案是可以的，不过我们的做法和你有些不同，一是我们会先将脾脏中的T细胞纯化出来，二是我们不加IL-2，CD28用的是1ug/ml，CD3是3ug/ml

大品咿呀哟

我们会用两种方式检测T细胞增殖1.ConA，2.CD3包被+游离CD28。
都是相通的步骤，磁珠分选出脾脏中的CD3+T细胞之后再去操作

coolling

我和你刺激方法不同，是在培养基里面直接加CD3和CD28刺激小鼠脾脏；
但是结果和你一样，都是只有一个峰
我培养了4天。

niwanmao

coolling 发表于 2022-8-10 16:45
我和你刺激方法不同，是在培养基里面直接加CD3和CD28刺激小鼠脾脏；
但是结果和你一样，都是只有一个峰
我 ...

可参考5楼和6楼 老站友们提供的方法，先磁珠分选出T细胞，纯化后再刺激。