脾脏结肠样本流式分析tregth17

AURORAYK · 发表于 2022-8-11 17:59:13

本帖最后由 AURORAYK 于 2022-8-11 18:01 编辑

各位老师好，想请教一下我要检测流式小鼠脾脏以及结肠组织中treg以及th17，但因学校被封闭无法及时上机检测，请问可以先从组织中提取出细胞-80冻存等待解封再进行测定吗，和普通的细胞复苏冻存步骤有何不同，这样会不会影响胞内因子以及细胞表面抗原标记呢，或者有没有更好的方法保存样本减少对结果的影响呢？期待各位大佬解答，不胜感激！

niwanmao · 发表于 2022-8-11 20:53:38

大概几天？时间久的话程序化冻存到液氮会比较好。

AURORAYK · 发表于 2022-8-11 23:03:34

niwanmao 发表于 2022-8-11 20:53
大概几天？时间久的话程序化冻存到液氮会比较好。

谢谢倪老师回复～看了很多帖子发现冻存的影响其实无法避免，但开放流式实验室至少要半个月时间吧，我还是试试冻到液氮里面

Climber · 发表于 2022-8-12 10:40:37

可以的，使用细胞实验常用的无血清冻存液就可以，冻存量一般是1ml冻存液 10M细胞，这里是总细胞，在-80摄氏度存放3个月是可以的，至少Treg和Th17没有问题，Treg还好，Th17因为需要刺激还是需要细胞状态稍微好点，有条件的话还是放液氮绝对安全

Climber · 发表于 2022-8-12 10:42:39

其实我们经常冻存小鼠来源的细胞，以脾脏细胞为例，冻存10M/管，3月内复苏其实在6-8M的活细胞，我觉得可以接受，毕竟小鼠模型来的不容易啊，液氮放个一年都没问题我们还能分析去年的细胞呢

AURORAYK · 发表于 2022-8-12 20:10:28

Climber 发表于 2022-8-12 10:40
可以的，使用细胞实验常用的无血清冻存液就可以，冻存量一般是1ml冻存液 10M细胞，这里是总细胞，在-80摄氏 ...

学到了，非常感谢老师回复～我看您说的是总细胞，请问可以percoll密度梯度离心分离后冻存到液氮吗？

Climber · 发表于 2022-8-13 08:45:42

AURORAYK 发表于 2022-8-12 20:10
学到了，非常感谢老师回复～我看您说的是总细胞，请问可以percoll密度梯度离心分离后冻存到液氮吗？ ...

你说的结肠是吧，嗯非常有必要纯化一下再冻存

AURORAYK · 发表于 2022-8-14 17:15:36

Climber 发表于 2022-8-13 08:45
你说的结肠是吧，嗯非常有必要纯化一下再冻存

好的，谢谢您～

晓翰龍卿 · 发表于 2022-9-27 15:47:01

Climber 发表于 2022-8-13 08:45
你说的结肠是吧，嗯非常有必要纯化一下再冻存

麻烦请教下老师，你们结肠固有层细胞怎么分离的，我分出的细胞很少。

lukequ · 发表于 2023-6-25 22:12:38

各位大佬，10M个细胞到底是多少个细胞啊？

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