胞浆染色的疑惑

wangyekai

在某个讲义中看到，胞浆染色的步骤是：制备2管，一管为染色表面，一管染色表面与膜内，两者存在差异可认为胞浆有表达。
应该这么做？

niwanmao

wangyekai 发表于 2011-8-1 20:59

                               
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在某个讲义中看到，胞浆染色的步骤是：制备2管，一管为染色表面，一管染色表面与膜内，两者存在差异可认为 ...

你所描述的应该属于用空白对照来作为胞内标记的阴性对照。我认为是不太合适，理由如下：
1、空白对照无法反映一些非特异性结合的背景。
2、经过破膜处理之后，经常会出现阴性界限增高的情况，这时空白对照更加不合适了，有时候同型对照也不是非常好。
我在做免疫分型时，喜欢用内对照，例如我们做MPO这个胞内标记，患者骨髓或外周血中的淋巴细胞就可以作为其阴性内对照，因为标本中的这几群细胞接受的处理是一致的。

蹦蹦豆

不用吧，我们只做一管对照和一管先标胞膜再标胞浆的标记就可以了

mary_jhy2

   支持内对照，只要把门拖到不同的细胞群上就能看出来！

wengxiangqin

胞浆的阴性对照确实比较麻烦。对于ALL淋的患者，内对照比较理想，不管是TDT、CD79a还是cu，选择正常成熟淋巴细胞作阴性对照都很准确，因为淋巴细胞不管成熟与否，其非特异结合和本底荧光均非常接近。浆细胞肿瘤的患者，做胞浆K、L轻链时，我们喜欢选粒细胞群体来设定阴、阳性界限。对于AML的患者，细胞FSC、SSC与淋巴细胞接近时，用淋巴细胞做内部的阴性对照比较理想，当散射光明显大于淋巴细胞时，就不太合适了，此时我们选择胞浆同型对照来判定阴、阳性。需要胞浆同型对照和内对照结合起来判断结果会更可靠。

niwanmao

wengxiangqin 发表于 2011-9-8 14:48

                               
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胞浆的阴性对照确实比较麻烦。对于ALL淋的患者，内对照比较理想，不管是TDT、CD79a还是cu，选择正常成熟淋 ...

没错，选择内对照的时候，FSC、SSC这两个特征很重要，要尽可能选择这两个指标比较接近的正常细胞作为内对照。