有做过间充质干细胞的看看这张图

chujindong

这是几天前给别人做的间充质干细胞，说是从某公司拿到的，理论上应该是一群细胞。我没做过间充质干细胞，发现它跟一般的细胞很不一样。一般的细胞用软件默认的设置就可以通过调节电压调处细胞群落，但这个不行，必须改设置。改完后也不是很理想。大家看看：

看样子似乎是两群细胞，就选定的这一群细胞来说，直方图上的跨度非常大。但他还是正态分布的。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-4 22:56

                               
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这是几天前给别人做的间充质干细胞，说是从某公司拿到的，理论上应该是一群细胞。我没做过间充质干细胞，发 ...

我以前帮研究生做过，虽然印象不深，但肯定不会用LOG来取。如果用LOG模式的话，会取到很多微小的干扰信号，这方面可以从血小板的获取上得到验证。

间充干细胞还是比较大的，如果用正常的FSC－SSC线性模式取不到，绝对是标本处理的问题。因为间充干属于“贴壁细胞”，可贴在饲养层细胞上，也可贴在培养板上，所以可能是处理时吹打过猛或者消化时对其产生了损伤。

chujindong

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那站长看这图有什么问题呢？我们做过好几次，每次都这样。这个是公司直接拿过来的，自己都没培养就上流式了。我改的设置是area scaling，从1.08减到0.02才看到细胞群。默认的设置是看不到细胞群的，不论是碎片还是细胞都在坐标轴附近晃。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-5 12:34

                               
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那站长看这图有什么问题呢？我们做过好几次，每次都这样。这个是公司直接拿过来的， ...

很难说，还需要看其它标记表达的情况。

haven_t

改什么设置？除了电压补偿域值还有什么参数可改呢？area scaling真的没听过，请问是什么功能？

haven_t

倪老师是用什么型号的仪器啊，图的坐标是10的5次方，应该是数字型流式的数据，数字型流式全用线性获取并储存，电脑对数转换后显示的。

niwanmao

haven_t 发表于 2011-8-5 15:23

                               
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改什么设置？除了电压补偿域值还有什么参数可改呢？area scaling真的没听过，请问是什么功能？
...

area scaling应该是其它机型上使用的设置方式，类似于我用的FACS CALIBUR上获取时每个参数后面的Mode（有Lin和Log两种模式）。

niwanmao

haven_t 发表于 2011-8-5 15:27

                               
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倪老师是用什么型号的仪器啊，图的坐标是10的5次方，应该是数字型流式的数据，数字型流式全用线性获取并储 ...

有Log模式直接获取的，见FACS Calibur的控制面板，每个参数都可设置为Lin或Log模式。
http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... 1&extra=#pid376这个flash教程的第4页。

haven_t

哦，明白，那已经是模拟时代的东西了，其实是放大器的类型，以前我用vantage也是如此，不过现在新的都省了，对数放大器和补偿电路都用电脑运算得到，所以现在数字型的获取后可以随意对坐标作对数与线性切换。后来的hyperlog和logical转换就是以此为基础的。

haven_t

样本细胞体积差异太大，线性坐标无法达到该动态范围，所以会出现这种情况。对数转换的特点是数值大的数据在图形上进行压缩，数值小的数据占用图形空间较多，使图形能显示的动态范围变大。你用这个图试想下，如果把坐标换成线性，以10的4次方为例，这个图的前1/10地方就要显示90%的细胞，后面的地方都是空荡荡的，再看看10的3次方，有将近一半的细胞堆在图形前1%的位置，这样肯定是不能分析的。建议你在镜下看一下你的细胞到底什么回事。