排除粘连体，究竟散射光信号好还是荧光好？

niwanmao

粘连体的排除，通常基于散射光参数的脉冲信号：面积，A；高度，H；或宽度，W
俩俩组合可用于区分信号究竟是单细胞还是粘连体。最常用组合是FSC-A 与 FSC-H，也可用 FSC-H 与 FSC-W、SSC-H 与 SSC-A 以及 SSC-H 与 SSC-W。

但是，荧光信号的A、H或W也可用于区分粘连体，这在细胞周期分析中经常使用，对于识别真正的 G2/M 期细胞和 G0/G1 期至关重要。然而，在研究活化或增殖细胞时，用FSC和SSC的脉冲信号区分单细胞和粘连体可能就很困难了。西班牙的Laura G. Rico等人比较了使用散射光和荧光排除粘连体的能力，发现：对于高度浓缩的细胞产物和病理标本，无论是 FSC 和 SSC 高度、面积和宽度均能很好排除粘连体（下图的A氯化铵裂解液、B含多聚甲醛醛的商品化红细胞裂解液），同样，利用活细胞DNA 染料（例如 Vybrant DyeCycle Violet（DCV）染料或 Hoechst 33342）也能很好的排除粘连体（下图D和E），但是，如果是不裂红不洗涤的话，FSC和SSC的脉冲信号就无法排除粘连体了，一团糟（下图C），而活细胞DNA染料的脉冲仍然不仅能够排除掉红细胞，而且仍然能很完美的排除粘连体。



所以，如果你的标本希望不裂解不洗涤的话，可试一下用活细胞核酸染料的A、H排除一下粘连体看看吧。

信源：Rico LG, Bardina J, Bistué-Rovira À, et al. Accurate identification of cell doublet profiles: Comparison of light scattering with fluorescence measurement techniques [published online ahead of print, 2022 Sep 16]. Cytometry A. 2022;10.1002/cyto.a.24690. doi:10.1002/cyto.a.24690

Yuck

长知识。以前没用过。

飞翔

进行的T细胞增殖检测，单细胞这么画门适合吗

niwanmao

飞翔 发表于 2023-1-28 13:42
进行的T细胞增殖检测，单细胞这么画门适合吗

单细胞门，感觉是由于仪器原因导致未在斜向直线上，这样容易把大细胞去掉了，还是不要设单细胞门了吧。

飞翔

niwanmao 发表于 2023-1-28 20:16
单细胞门，感觉是由于仪器原因导致未在斜向直线上，这样容易把大细胞去掉了，还是不要设单细胞门了吧。 ...

BD的仪器，这个斜向直线需要单独设置吗？T细胞增殖实验的话，右上部分的大细胞是增殖的T细胞？

niwanmao

飞翔 发表于 2023-1-29 07:55
BD的仪器，这个斜向直线需要单独设置吗？T细胞增殖实验的话，右上部分的大细胞是增殖的T细胞？ ...

右侧偏离的那些大细胞，可能不是T细胞，从singlet门的意义来说，只是纯粹排除粘连细胞，而不是圈淋巴细胞，所以如果把这些细胞排除在外，就失去了这个门的意义。

飞翔

niwanmao 发表于 2023-1-29 14:06
右侧偏离的那些大细胞，可能不是T细胞，从singlet门的意义来说，只是纯粹排除粘连细胞，而不是圈淋巴细胞 ...

明白了，谢谢，倪老师

飞翔

飞翔 发表于 2023-1-29 15:38
明白了，谢谢，倪老师

不过那群大的细胞可能是单核细胞吗？也是CD4阳性的细胞

niwanmao

飞翔 发表于 2023-1-29 15:39
不过那群大的细胞可能是单核细胞吗？也是CD4阳性的细胞

有可能，通过CD4的强度可区分。但最好是有CD3等特异性标记去排除。