流式分选后培养问题（大肠杆菌）

wh21211314

目前操作：阳性菌/阴性菌=1:100（大肠杆菌） ，混合菌经流式分选后，直接涂平板，挑单克隆进行菌落PCR验证


问题：发现挑的单克隆，既有阳性菌也有阴性菌，这是什么原因？   分选后的大肠杆菌直接涂平板的操作是不是存在问题？  请教大师

特殊现象：由于参与分选的菌是经蛋白表达过的，分选后的菌涂在平板上单克隆 菌的颜色泛白，且表面不光滑。


请教一下大师，谢谢！

niwanmao

wh21211314 发表于 2022-9-23 09:22
分选的指标是Ratio值，阳性菌和阴性菌差别不是很明显，所以会有一些阴性菌被分选出来。我的阴性菌也是有 ...

是否启动单细胞分选模式，每个孔一个菌，分开来培养？

niwanmao

是否分选的指标，无法分出纯粹的阴性菌或阳性菌？

wh21211314

niwanmao 发表于 2022-9-23 09:15
是否分选的指标，无法分出纯粹的阴性菌或阳性菌？

分选的指标是Ratio值，阳性菌和阴性菌差别不是很明显，所以会有一些阴性菌被分选出来。我的阴性菌也是有荧光的，所以可能会分选出来有假阳性。  但是现在的问题就是，如何能知道分出来的菌，有多少是阳性菌，有多少是阴性菌。从目前的结果来看，涂平板是不合适的，因为长出来的单克隆，既有阳性菌也有阴性菌。   谢谢老师

wh21211314

niwanmao 发表于 2022-9-23 09:25
是否启动单细胞分选模式，每个孔一个菌，分开来培养？

好嘞，谢谢老师，我去试试！