荧光问题

飞翔 · 发表于 2022-9-27 05:43:13

多聚甲醛（PFA）可能会导致PE荧光检测下降吗？细胞染色后固定，固定15min后洗掉重悬，同一样本上机时间间隔时间3-4小时，PE荧光由3000降到1000，是什么原因

niwanmao · 发表于 2022-9-27 07:59:40

会的。所以对于多聚甲醛固定后的样本，对照也需要固定过。

飞翔 · 发表于 2022-9-27 20:52:10

都固定了，什么原理会导致荧光降低呀，正常染色后固定可以保存多久呀

niwanmao · 发表于 2022-9-27 21:09:57

飞翔发表于 2022-9-27 20:52
都固定了，什么原理会导致荧光降低呀，正常染色后固定可以保存多久呀

固定后，对细胞表面很多蛋白质的构象或多或少都有影响，从而影响其结合能力。从而导致荧光变化。

染色后固定，可保存多久，应该视荧光淬灭程度而定，一般避光过夜是可以的。

飞翔 · 发表于 2022-9-29 19:14:30

niwanmao 发表于 2022-9-27 21:09
固定后，对细胞表面很多蛋白质的构象或多或少都有影响，从而影响其结合能力。从而导致荧光变化。

染色后 ...

就是避光过夜了，第二天10点检测和14点检测，差的比较多

niwanmao · 发表于 2022-9-29 19:43:30

飞翔发表于 2022-9-29 19:14
就是避光过夜了，第二天10点检测和14点检测，差的比较多

这可能说明你要检测的靶标特别容易受到固定影响，不适合固定后检测。那就只能当天做当天检测了。

Climber · 发表于 2022-10-3 10:54:11

不同靶标及不同克隆号的抗体对于多聚甲醛的耐受是不一样的，有些克隆号的抗体在用多聚甲醛处理后会发生信号下降的情况。可参考https://www.thermofisher.cn/cn/z ... considerations.html

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