做脑组织样本的检测，但细胞不分群

augurphoenix

请问一下各位老师，我做的是小鼠脑的样本，用的匀浆机制备的单细胞悬液，请问一下为什么上机以后细胞都不分群呢？
是样本处理的问题还是电压什么的？
样本处理我是剪碎组织后放入EP管和研磨珠再放到匀浆机里60HZ 3次，后续用MACS的Debris removal来提取的细胞（不是用的percoll）

niwanmao

是不是在染色之前，先做个台盼蓝染色，在显微镜下看一下。

augurphoenix

niwanmao 发表于 2022-10-22 15:29
是不是在染色之前，先做个台盼蓝染色，在显微镜下看一下。

谢谢倪老师回复，所以是这些上面的可能都是死细胞吗？因为我的配色里有做zombie染色，所以就没用台盼蓝染看看，请问这一步是必须的吗？

帖子我已经更新了zombie（violent laser 405）染色的图（最后一张），感觉看起来好像死细胞也不是特别多...?（fig4左上是blank，由于blank只收了5000细胞所以很小一块，其他都是收了50000细胞）

niwanmao

augurphoenix 发表于 2022-10-25 18:04
谢谢倪老师回复，所以是这些上面的可能都是死细胞吗？因为我的配色里有做zombie染色，所以就没用台盼蓝染 ...

不是死细胞，我担心的是细胞全碎了。

augurphoenix

niwanmao 发表于 2022-10-25 20:48
不是死细胞，我担心的是细胞全碎了。

那我下次还是用酶解试试看吧...谢谢老师！

半年y

可以percoll纯化一下，直接研磨的话效果很差