CD19 CAR-T治疗后，B-ALL患者的MRD监测11色方案及其设门逻辑解析

niwanmao

在CAR-T 治疗后，1/2的B-ALL患者出现 CD19 下调。由于 CD19 阴性的发生率较高，有必要寻找具有相似诊断价值的抗原替代 CD19 作为主要的B系抗原。在大型 BCP-ALL 儿童患者队列 (n = 519) 中检测了CD22、CD24、CD10和细胞内 (i)CD79a 的初始表达，结果发现，这些CD分子的表达率相当高，约88.9%(CD22)、83.7%(iCD79a)、88.2%(CD10) 和94.7%(CD24) 的患者几乎所有肿瘤细胞（白血病细胞表达率均超过95%）均表达检测这些抗原。而且，超过95%的患者，几乎所有的原始细胞上都表达了至少一种上述标记物。因此，建议在常规抗体组合中加入**CD22、CD24和iCD79a**。

根据此思路，Mikhailova等人在2022年11月5日的Cancers (Basel)杂志上发表了一个11色方案，在CD19 CAR-T治疗后的患者中具有极强的可用性。

方案如下：


MRD分析的逻辑如下图，主要思路为采用CD22 和 iCD79a对B细胞进行设门（一种或两种），如果两者均未强表达（弱或部分阳性），则使用CD10或CD24进行B细胞设门，CD24虽然成熟中性粒也可表达，但可通过CD45、SSC排除掉，至于确认白血病细胞的方法，有LAIP和DfN两种方式，DfN是优先推荐的：



但在 DFN 方法的应用中也存在几个陷阱，因为DfN方法是基于对正常 B 细胞分化模式的理解，从散点图上的“空白区域”找白血病原始细胞，但是这些“空白区域”在哪里，是否存在，完全取决于B细胞设门标记的选择，如果仅使用 CD22 设门，CD22+细胞群将会包括以下正常细胞：CD22阳性的嗜碱性粒细胞、浆细胞样树突状细胞 (PDCs)、各阶段的BCP和成熟B细胞。如果仅应用iCD79a，则所谓的“B细胞”区域还会把浆细胞圈进去。如果利用两种标记物的逐级设门，则可选出正常的BCP（CD19阳性和 CD19 阴性）和成熟B细胞作为 MRD 分析的正常背景。

值得注意的是，CD19 CAR-T治疗后正常CD19阴性BCP的相对扩增可使这些细胞较为常见，应避免将其误解为CD19阴性复发。

下图是MRD分析策略的实际应用，下图联合使用 CD22 和 iCD79a 进行 B 细胞设门，从而进一步进行MRD分析。第一行是设门步骤，第二行和第三行显示散点图上CD22(+)iCD79a(+) 细胞的定位。淡蓝色，总B细胞门；红色，白血病细胞；绿色，CD19(+)BCPs；紫色，CD19(-)BCPs；深蓝色，成熟 B 细胞；灰色，其他细胞。



Mikhailova, E. et al. Reliable Flow-Cytometric Approach for Minimal Residual Disease Monitoring in Patients with B-Cell Precursor Acute Lymphoblastic Leukemia after CD19-Targeted Therapy. Cancers 2022, 14, 5445. https://doi.org/10.3390/cancers14215445