细胞固定保存问题

liuyang

各位老师，我想问下细胞固定完之后可以放在-80度冰箱吗，我用的是BD 5×lyse/Fix Buffer（在附件里 558049.pdf (233.63 KB, 下载次数: 27)

2022-12-1 20:48 上传

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），不知道这个试剂放到-80度会结冰吗，可能要存放很长时间，而且我想染胞膜与胞内蛋白，但是由于胞内抗体还没到货，细胞也养的差不多了，我想的是先固定完放到-80度，然后等抗体到了再打孔染胞膜与胞内的蛋白，但是我看大家一般都先染胞膜再染固定打孔染胞内，所以现在有两个问题，第一个如何固定保存细胞存放的问题，第二是先染胞膜再固定放到-80度，等胞内抗体到了再染胞内还是直接把细胞冻存不染抗体比较好？谢谢各位！

niwanmao

真要保存，还是建议按照程序降温的方式加入冻存液，冻到液氮里面去。

srfts

我们之前做过。先Lyse/FIX之后PermIII处理，放-80℃放置。染色的时候直接拿出来全染。我们做的是磷酸化，大概稳定可放1个月以上。

niwanmao

srfts 发表于 2022-12-5 16:07
我们之前做过。先Lyse/FIX之后PermIII处理，放-80℃放置。染色的时候直接拿出来全染。我们做的是磷酸化，大 ...

等于说表面标记也是在后面跟胞内标记一起染是吧？嗯，这样的话有一定的可行性，不过不知道是否做过与新鲜样本的对比呢？

srfts

niwanmao 发表于 2022-12-5 20:48
等于说表面标记也是在后面跟胞内标记一起染是吧？嗯，这样的话有一定的可行性，不过不知道是否做过与新鲜 ...

老师我们做过的  这个是稳定性验证。是先做了新鲜样本作为基线，剩余的使用上面步骤处理，然后每隔一段时间跑一次流式 然后与基线对比。暂时做到1个月是稳定的。

srfts

niwanmao 发表于 2022-12-5 20:48
等于说表面标记也是在后面跟胞内标记一起染是吧？嗯，这样的话有一定的可行性，不过不知道是否做过与新鲜 ...

是的 是胞内胞外一起染

niwanmao

srfts 发表于 2022-12-5 22:03
老师我们做过的  这个是稳定性验证。是先做了新鲜样本作为基线，剩余的使用上面步骤处理，然后每隔一段时 ...

感谢反馈，这样对于大家使用这种应急方式有了一定信心。

liuyang

srfts 发表于 2022-12-5 16:07
我们之前做过。先Lyse/FIX之后PermIII处理，放-80℃放置。染色的时候直接拿出来全染。我们做的是磷酸化，大 ...

好的，谢谢

Aptx4869

srfts 发表于 2022-12-5 16:07
我们之前做过。先Lyse/FIX之后PermIII处理，放-80℃放置。染色的时候直接拿出来全染。我们做的是磷酸化，大 ...

你好，请问你们是怎么做先Lyse/FIX之后PermIII处理的？

srfts

Aptx4869 发表于 2024-4-26 21:06
你好，请问你们是怎么做先Lyse/FIX之后PermIII处理的？

使用BD的裂红固定液，裂红固定后洗1-2遍，直接perm孵育。