外周血检测Th17细胞遇到的问题

wangmei19850809

老师们好，我刚开始接触流式，做的是外周血检测Th17细胞，预实验完全没有测到，有些问题想请教您。我买的的固定破膜液是invitrogen的，说明书上说先固定，然后孵育洗细胞，再将破膜液及CD4-FITC,IL-17-PE同时加入，再孵育，但我看文献都是先染表面CD4-FITC，然后破膜打孔加入IL-17-PE，我想请教我是按说明书来做还是按照文献来做，有做过类似研究的老师请多多指教，谢谢！

niwanmao

wangmei19850809 发表于 2011-8-13 13:10

                               
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老师们好，我刚开始接触流式，做的是外周血检测Th17细胞，预实验完全没有测到，有些问题想请教您。我买的的 ...

对于胞内标记的步骤，可参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=216
胞膜的CD4、CD8等肯定是在固定之前先染，这是绝对不会错的。固定之后抗原结合位点构象都发生变化了，还怎么结合？所以，我估计你拿到的这份说明书可能有点问题，或者是你理解时出现了偏差。

wangmei19850809

明白了，谢谢。。。

lianronghu0207

你好，老师，我也刚刚做TH17细胞的实验，我想向你咨询一下所用到sigma的的刺激剂PMA,monensin，lonomycin，我在购买时发现刺激剂有几种不同类型的，我选择的是Ionomycin caicium salt，Monensin sodium salt，Phorbol 12-myristate 13-acetate，想让老师给参考一下是否可以选择这三个刺激剂？

niwanmao

lianronghu0207 发表于 2011-8-15 14:22

                               
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你好，老师，我也刚刚做TH17细胞的实验，我想向你咨询一下所用到sigma的的刺激剂PMA,monensin，lonomycin， ...

请sugarswallow解答一下，我觉得应该是可以的。

chujindong

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我用的离子霉素跟你是一样的，莫能霉素是液体的，PMA也是粉末的。我觉得应该没问题。