请教MSLN-CAR-T 细胞在临床上的检测方法

悠游

各位大佬好，我们最近准备对病人外周血和腹水中的MSLN-CAR-T 细胞进行检测，我们计划使用荧光标记的MLSN（FITC-MLSN）与MSLN-CAR-T 细胞进行结合，来标记CAR-T细胞，其他还有CD45和CD3抗体，正常空白全血中加入MSLN-CAR-T 细胞后，验证参数（Antibody specificity、Carryover、FMO、A&P）都过了，但是实际样本检测中我们都没有检测到MSLN-CAR-T 细胞，想知道可能导致的原因，希望大家不吝赐教！

我们现在内部认为的原因，可能是因为相较于正常人，病人体内存在较多游离MSLN，已经跟MSLN-CAR-T 细胞结合了，使我们FITC-MLSN无法与MSLN-CAR-T 细胞结合了，导致无法检测到MSLN-CAR-T 细胞。谢谢大家！

悠游

想要向大家请教，我们现在是需要买MSLN标准品吗，用空白血梯度稀释后做验证，然后样本分析中还要增加MSLN的浓度检测吗？谢谢大家

niwanmao

血清中有游离的Mesothelin吗？这个是GPI锚蛋白，应该是表达在细胞表面，只不过正常组织很少，但肿瘤组织过表达。

另外，不知道你选择的Mesothelin FITC是否确实能结合CAR，如果确实不行，可改用Protein L检测吧。

scaleus

你这个是串联了FITC的MSLN重组蛋白吗 我们用B7H3重组蛋白检测体内的B7H3-CAR-T是可以检测到的

Yuck

将CAR转进T细胞系，来看看结果。

悠游

niwanmao 发表于 2023-1-10 20:25
血清中有游离的Mesothelin吗？这个是GPI锚蛋白，应该是表达在细胞表面，只不过正常组织很少，但肿瘤组织过 ...

谢谢倪老师的指导，我之前没有相关的项目经验，不知道您那边有什么参考资料可以学习一下吗？麻烦您了

悠游

scaleus 发表于 2023-1-10 22:30
你这个是串联了FITC的MSLN重组蛋白吗 我们用B7H3重组蛋白检测体内的B7H3-CAR-T是可以检测到的 ...

是的，外部连接了FITC的MSLN，现在临床病例中都检测不到CarT细胞，不知道什么原因，我们现在查到说肿瘤组织中高表达，不知道是不是会影响我们荧光抗体与CarT细胞的结合情况，导致我们无法检测到。

悠游

Yuck 发表于 2023-1-11 08:46
将CAR转进T细胞系，来看看结果。

不好意思，因为我之前没有这方面的项目经验，没太明白您的意思，能够帮忙解释一下吗，太感谢了！

niwanmao

悠游 发表于 2023-1-13 11:04
谢谢倪老师的指导，我之前没有相关的项目经验，不知道您那边有什么参考资料可以学习一下吗？麻烦您了 ...

因为无法确认你采用的Mesothelin FITC 是否能确定与CAR-T结合，所以我觉得是否用Protein L先来测一下更合适，因为Protein L还是用的蛮广泛的。

悠游

niwanmao 发表于 2023-1-13 13:00
因为无法确认你采用的Mesothelin FITC 是否能确定与CAR-T结合，所以我觉得是否用Protein L先来测一下更合 ...

倪老师，我们之前做过验证，特异性是可以的。
试剂信息如下：
试剂名称：FITC-Labeled Human Mesothelin/MSLN(296-580) Protein，Fc Tag
生产厂家：Acro
货号：MSN-HF253