老师们，小鼠外周血的裂红液效果不佳

流123456

各位老师，最近要用流式测定小鼠外周血中的中性粒细胞，心脏采血至于EDTA抗凝管中，后每50ul全血加入200ul的BD红细胞裂解液室温孵育6-10min，期间不断颠倒混匀，离心后发现整个沉淀都是红色的，刚开始我还以为裂红不彻底，就又裂了一次，并且放在了37摄氏度的水浴箱里，结果也一样，PBS洗涤重悬后的液体也是红色，这是什么原因啊？各位老师有推荐好用的裂红液裂小鼠外周血吗。

niwanmao

参见：
小鼠外周血的红细胞裂解方法
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-10193-1-1.html
(出处: 流式中文网)

Climber

BD的裂解液啊，很好用的，我们经常用来绝对计数，可能的原因是你的样本加的太多了，抗凝全血用10ul足够了，先与10ul抗体混合物孵育之后，然后用200ul的BD裂解液，室温10min，之后加入1倍体积PBS终止裂解上机即可，其实不需要洗的，只要血液采集合格，不存在堵机器的

多纳泰罗豪

Climber 发表于 2023-1-27 17:44
BD的裂解液啊，很好用的，我们经常用来绝对计数，可能的原因是你的样本加的太多了，抗凝全血用10ul足够了， ...

有货号吗

半年y

niwanmao 发表于 2023-1-17 07:21
参见：
小鼠外周血的红细胞裂解方法
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-10193-1-1.html

老师，我试过这个方法了，感觉不是很好用，裂不干净，还是有很多的红细胞

niwanmao

半年y 发表于 2023-5-8 09:51
老师，我试过这个方法了，感觉不是很好用，裂不干净，还是有很多的红细胞 ...

1、裂解尽量大体积，例如100ul血+2ml裂解液。
2、如果一次裂不干净，可离心后，再裂一次。

半年y

niwanmao 发表于 2023-5-8 10:21
1、裂解尽量大体积，例如100ul血+2ml裂解液。
2、如果一次裂不干净，可离心后，再裂一次。 ...

老师，你那个回复贴是指南里用蒸馏水裂解，不是氯化铵裂解液。我指的是蒸馏水裂解法效果不好

niwanmao

半年y 发表于 2023-5-9 22:31
老师，你那个回复贴是指南里用蒸馏水裂解，不是氯化铵裂解液。我指的是蒸馏水裂解法效果不好 ...

氯化铵裂解液有没有试过？

半年y

niwanmao 发表于 2023-5-10 11:05
氯化铵裂解液有没有试过？

试过的老师，小鼠外周血红细胞用氯化铵溶液裂解还是不充分，但可以通过多切阈值改善，至于这个蒸馏水的方法，我觉得也没有太出彩

niwanmao

半年y 发表于 2023-7-9 16:22
试过的老师，小鼠外周血红细胞用氯化铵溶液裂解还是不充分，但可以通过多切阈值改善，至于这个蒸馏水的方 ...

是不是用量不足？100ul用2ml或更大的量。