老师们，请教小鼠脾脏中B细胞亚群流式分选

yuwenbo87

各位老师，这边有个小需求：

拿到-小鼠-，-脾脏-悬液后，想做一下多重荧光染色，把这四类细胞分选出来：
1. 生发中心B细胞（B220+, CD19+, GL7+）
2. 浆母细胞（B220low, CD19+, GL7-, CD138+）
3. 浆细胞（B220low, CD19-, GL7-, CD138+）
4. 记忆B细胞（B220+, CD19+, GL7-, CD138-）
括号里的染色方式可行吗？有没有更好的呢？

之前只做过几次单色荧光流式。。。，对流式了解不多，请各位老师多多批评，多多提供宝贵意见。
描述不清楚的地方请谅解，我会及时补充说明清楚。
之前也看过Ni老师的帖子，对我这种门外汉来说有点看不太懂。。。
https://flowcyto.cn/bbs/forum.ph ... 6%E7%BB%86%E8%83%9E
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4724-1-1.html
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3330-1-1.html

谢谢！期待各位老师的回复！

Climber

我更倾向于于生发中心B细胞应该是以B220+ CD19+ CD95+ GL7+，关于浆母细胞和浆细胞，首先CD138+ 然后通过B220 和CD19分为三个阶段，要检测记忆B细胞应该是要针对特定抗原的记忆B细胞吧，关于记忆B细胞我并不熟悉

Climber

另外脾脏特有的滤泡B细胞和边缘区B细胞可以通过CD23 CD21进行鉴定

yuwenbo87

Climber 发表于 2023-1-31 12:07
我更倾向于于生发中心B细胞应该是以B220+ CD19+ CD95+ GL7+，关于浆母细胞和浆细胞，首先CD138+ 然后通过B2 ...

感谢您的回复。
我这边记忆B不分选抗原特异性的。插个小问题买的spf小鼠如果完全没免疫过的话，有记忆b吗？
另外，您觉得这样能分出记忆B不？记忆B细胞：B220+, CD19+, GL7-, CD138-

niwanmao

yuwenbo87 发表于 2023-1-31 21:52
感谢您的回复。
我这边记忆B不分选抗原特异性的。插个小问题买的spf小鼠如果完全没免疫过的话，有记忆b吗 ...

SPF完全未免疫过，是否有记忆B，目前还没有明确的说法。
应该说，理论上没有，但实际，或许有微量，因为谁都无法保证绝对无菌。

yuwenbo87

niwanmao 发表于 2023-2-1 08:47
SPF完全未免疫过，是否有记忆B，目前还没有明确的说法。
应该说，理论上没有，但实际，或许有微量，因为 ...

请教倪老师，那记忆B除了有抗原特异性受体外，还有其他可以用来标记的marker吗？

niwanmao

yuwenbo87 发表于 2023-2-7 20:16
请教倪老师，那记忆B除了有抗原特异性受体外，还有其他可以用来标记的marker吗？ ...

使用转基因小鼠模型，用 NP 偶联鸡丙种球蛋白 (CGG) 免疫后，人为使得抗原特异性记忆 B 细胞相对数量升高，发现共刺激分子 CD80(B7-1) 可作为记忆 B 细胞标志物。（Tomayko MM, Steinel NC, Anderson SM, Shlomchik MJ. Cutting edge: hierarchy of maturity of murine memory B cell subsets. J Immunol 2010;185:7146–50.）

在IgM 和 IgG 同种型的 NP 结合记忆 B 细胞，> 60%表达CD80，其中大多数 (70%) 发生了体细胞突变。这意味着在同种型转换的记忆 B 细胞中，存在表达非突变 BCR 的细胞，因此与记忆 B 细胞的经典观点相反。

CD80、CD73、PD-L2 可区分出至少5个不同的记忆 B 细胞亚群。

yuwenbo87

niwanmao 发表于 2023-2-8 09:50
使用转基因小鼠模型，用 NP 偶联鸡丙种球蛋白 (CGG) 免疫后，人为使得抗原特异性记忆 B 细胞相对数量升高 ...

看了您之前的帖子，可以参考美天旎的说明书，帖子：https://flowcyto.cn/bbs/thread-7897-1-1.html

niwanmao

yuwenbo87 发表于 2023-2-9 20:30
看了您之前的帖子，可以参考美天旎的说明书，帖子：https://flowcyto.cn/bbs/thread-7897-1-1.html ...

不同时间查到的资料，只要有据可循，都是可用的。