免疫治疗时代，B-ALL或B-NHL MRD分析用什么来设门？

niwanmao

免疫治疗时代，针对各类B-ALL或B-NHL过表达的标记，治疗方法越来越多，在带来获益的同时，给流式检测MRD带来了极大的困扰。


CD19 靶向免疫治疗后，由于 CD19 阳性正常B细胞和白血病原始细胞耗竭以及复发时可能出现CD19 阴性表型，CD19不再是可靠的设门抗体。检测残留白血病原始细胞需要强调冗余和灵活性的新的设门试剂和策略。CD22 和 CD24 在骨髓成熟过程中在 B 系细胞中存在差异表达 (Duperray et al.，1990；Hunte et al.，1998；Uckun et al.，1992)，故成为圈选B细胞的合适替代设门试剂。使用 CD22 或 CD24作为设门抗体已在抗 CD19 免疫治疗后的 MRD 检测中进行了验证 (Cherian et al.,2018)。使用CD66b-、CD22/CD24+来定义“B细胞门”，并使用标准 DFN 结合 LAIP 方法来识别异常B细胞群，成功分析出CD19 阳性和 CD19 阴性白血病原始细胞，并显示与标准流式细胞术 B-ALL MRD 试验具有良好的相关性。


要注意的是，CD22或CD24+定义的B细胞门内，可能包括成熟细胞群和祖细胞。务必注意，应避免将这些正常细胞误认为异常原始细胞。
CD22或CD24+门内易被误认的正常成熟细胞群，如嗜碱性粒细胞 (Toba et al.，2002)、肥大细胞 (Escribano et al.，1998) 和浆细胞样树突状细胞 (Reineks et al.，2009)，其 CD22 表达各不相同。CD22 克隆至关重要，因为有些克隆更易结合这些细胞，包括嗜碱性粒细胞和浆细胞样树突状细胞 (Reineks et al.，2009)。加入其他不成熟标志物和可能在肿瘤性 B 淋巴母细胞上异常表达的抗原，有助于区分正常 CD22 阳性细胞和白血病原始细胞。
表达 CD22 而不表达 CD19 或 CD24的祖细胞群有两个：一群为下图绿色的细胞群，表达CD22 dim、CD34 bright和CD38 med，不表达CD10、CD20或CD24，可能是淋系多能祖细胞；另一群为下图深红色细胞，CD10 variable、CD20 dim、CD22 bright、CD34 bright、CD38 bright，可能是早期淋系前体细胞。这两群正常的祖细胞，在抗 CD19 CAR-T治疗后可能成比例增加，尤其需要引起注意，避免误认为白血病细胞。


最后，使用 CD22 或 CD24设门还得注意一个情形，就是B-ALL的一个亚型 (约20%) 中 存在CD24 表达异常降低或缺失 (Cherian et al.,2018；Uckun&Song,1993)，尤其是具有 KMT2A 重排的B-ALL(Coustan-Smith et al.,2011；Schwartz et al.,2003)，CD24缺乏是白血病原始细胞的异常免疫表型特征。然而，正常祖细胞中本身就存在CD24 阴性/CD22 阳性表型，所以此时特别需要谨慎，可以考虑用CD79a圈选B (Chen et al.,2022；Cherian&Stetler-Stevenson,2018)。最近的一项研究表明，cCD79a设门可有效检测 CD19 CAR T 细胞治疗后 B-ALL 患者的MRD，并预测 HSCT 后的结局 (Chen et al.,2022)，为 cCD79 设门是靶向治疗后的可行选择提供了初步证据。或者，可以尝试使用多种抗原（通常在B-ALL中过度表达的，并结合CD45/SSC）的灵活设门策略来评价异常群体。
在接受靶向不同抗原的多种免疫治疗的患者中，用CD19、CD22和CD24可能无法圈出B细胞，或仅能圈出少量B细胞，此时，需要对样本进行系统评价，并结合多个参数（包括B细胞抗原和不成熟相关抗原），以提高诊断准确性，例如改用CD10结合CD45/SSC的分群位置，再结合不成熟的标记等。


参考文献：Chen X, Gao Q, Roshal M, Cherian S. Flow cytometric assessment for minimal/measurable residual disease in B lymphoblastic leukemia/lymphoma in the era of immunotherapy [published online ahead of print, 2023 Jan 22]. Cytometry B Clin Cytom. 2023;10.1002/cyto.b.22113. doi:10.1002/cyto.b.22113