小鼠巨噬细胞和脾脏淋巴细胞共培养

1977038689@qq.c

大家好，请问一下我的圈门逻辑对不对。实验过程是取小鼠的脾脏破红之后和粘附巨噬细胞进行共培养，然后取共培养体系中上层进行染色处理，进行CD3 4 8分群。圈淋巴细胞这一部分有疑惑，是不是应该只圈红色圈圈部分，然后从CD45门里圈CD3的时候，很多细胞都在坐标轴之外，不知道原因是什么，而且最后CD4 CD8的分群也不理想，请问问题出现在哪里？

                               
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niwanmao

因为有了CD3++的设门，所以Lymphocytes门大小不影响结果。
至于贴壁的这些信号过多，请检查一下电压和补偿，看看究竟是哪种原因引起。

wxd

可以在FSC/SSC坐标中圈细胞之前，先在CD3/SSC坐标中把CD3+细胞圈出来，看一下T细胞在FSC/SSC坐标系中的位置。这个方法叫反圈门法，适用于不确定目标细胞群分布的情况。我之前做过树突状细胞和脾脏细胞共培养的实验，印象中T细胞活化之后会有体积上的变化，在FSC/SSC坐标系中分为两群。所以你的这个圈门方法是没问题的。
至于CD4/CD8分群不理想，不知道你有没有检测未经共培养的脾脏细胞中淋巴细胞的比例。没有的话， 你需要用未经共培养的脾脏细胞，染色确认一下是不是遗传背景、抗体浓度、仪器参数设置的原因。这个实验一定要做，只有确认这些参数都没有问题，你的检测结果才是可信的。

1977038689@qq.c

niwanmao 发表于 2023-2-6 21:24
因为有了CD3++的设门，所以Lymphocytes门大小不影响结果。
至于贴壁的这些信号过多，请检查一下电压和补偿 ...

好的，谢谢老师

1977038689@qq.c

wxd 发表于 2023-2-7 08:43
可以在FSC/SSC坐标中圈细胞之前，先在CD3/SSC坐标中把CD3+细胞圈出来，看一下T细胞在FSC/SSC坐标系中的位置 ...

感谢群友提醒，非常有用