单染跟双染的凋亡细胞特别少是操作问题还是上机问题，求解答

cgm

niwanmao

单阳和双阳的细胞群体都出来了，应该不是试剂的问题。

可能性更大是样本本身就是凋亡率低。

cgm

因为同样的实验还做过一次，上次就很高，有20多，我这个是心肌细胞，缺氧让他凋亡的，然后又加了诱导剂，凋亡率不应该这么低啊，我在试试吧，谢谢老师。

niwanmao

cgm 发表于 2023-2-17 09:06
因为同样的实验还做过一次，上次就很高，有20多，我这个是心肌细胞，缺氧让他凋亡的，然后又加了诱导剂，凋 ...

主要看重复多次的结果。有时候操作的时候，诱导药物的剂量有差异，或者其它实验因素影响了凋亡率，都可能使得凋亡率出现波动。

所以尽量多重复几次，科研中，至少要三次重复出相似的数据，才算是可靠的，只有一次20％多，不能用于判断实验效果的。

cgm

好的，我在试试。谢谢老师。

tiger

cgm 发表于 2023-2-17 10:13
好的，我在试试。谢谢老师。

1 镜下观察，有明显的凋亡吗？
2 收集细胞时，培养基不可丢弃，坏死细胞会漂浮在培养基中。

cgm

tiger 发表于 2023-2-17 11:08
1 镜下观察，有明显的凋亡吗？
2 收集细胞时，培养基不可丢弃，坏死细胞会漂浮在培养基中。 ...

镜下观察有明显凋亡，应该是fitc抗体出问题了，标记不上

HGPWDLH

做单染了吗？我用的试剂盒和你的一样，看起来没调补偿

862789366

我也觉得是未调补偿，下面的两张图是我做实验的图，补偿前和补偿后的图。

wmj123456

tiger 发表于 2023-2-17 11:08
1 镜下观察，有明显的凋亡吗？
2 收集细胞时，培养基不可丢弃，坏死细胞会漂浮在培养基中。 ...

老师，请问下，如果显微镜下观察到细胞变圆皱缩了，但是流式测的凋亡率只有7%，跟预期的偏低，这种情况可能是什么原因？是觉得显微镜和流式的结果不一致