检测血小板活化蛋白

咏叹调

全血检测血小板GP活化位点PAC-1受体时，需要设置RGDS对照竞争性抑制PAC-1的结合。请问是否需要先加入RGDS与全血，令血小板与阻断剂充分混合，再加入需要检测蛋白的抗体？能不能同时加入RGDS与PAC-1呢？还有在这个过程中是否可以用手指弹管底让全血均匀分散在抗体混合液中？我设置的静息血小板对照每次这样操作之后活化水平仍然非常高，怀疑就是染抗体时为了能染均匀就弹了，结果导致血小板活化了。可是不弹的话全血在抗体混合液里就是一颗液球，分散不开。请问是否有必要这样操作呢，或者如何操作既能保证混匀又能避免血小板活化呢

niwanmao

采集用的抗凝剂、采集到检测的时间，分别是什么？

咏叹调

niwanmao 发表于 2023-2-22 16:50
采集用的抗凝剂、采集到检测的时间，分别是什么？

老师，抗凝剂是柠檬酸钠，采血的话上午八九点采血，十点多染上抗体，采血管入血后轻微摇晃就放在装有冰袋的采血箱里了，要染抗体再取出。

niwanmao

咏叹调 发表于 2023-2-22 17:11
老师，抗凝剂是柠檬酸钠，采血的话上午八九点采血，十点多染上抗体，采血管入血后轻微摇晃就放在装有冰袋 ...

抗凝剂改成ACD试试，然后染色结果想办法传一下图上来，分别是FMO对照和实验管的图形。

咏叹调

niwanmao 发表于 2023-2-22 19:57
抗凝剂改成ACD试试，然后染色结果想办法传一下图上来，分别是FMO对照和实验管的图形。 ...

好的老师！我没有做FMO对照，只做了同型对照，第一张图是全血未加ADP的结果图

                               
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第二张图是同一个样品加了ADP的结果图

                               
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静息血小板活化水平高就算了，加了ADP我的PAC-1表达反而还变低了，我的ADP终浓度算的是10uM，完全想不明白为什么会这样

niwanmao

咏叹调 发表于 2023-2-23 09:05
好的老师！我没有做FMO对照，只做了同型对照，第一张图是全血未加ADP的结果图

从图上看，isotype似乎无法完全反映背景水平，可根据分群界限设置。但是未激活这管PAC-1可能还是有30％左右，偏高一些。

下回换成ACD抗凝再试试吧。

咏叹调

niwanmao 发表于 2023-2-23 09:18
从图上看，isotype似乎无法完全反映背景水平，可根据分群界限设置。但是未激活这管PAC-1可能还是有30％左 ...

嗯嗯！！感谢老师的回复！！