巨噬细胞M1检测

soonball

各位老师，想请教大家关于巨噬细胞极化检测的内容

我的实验是一种Evs作用于巨噬细胞，检测其促进巨噬细胞分化的方向，查询众多资料，发现M2的难以诱导。
THP-1铺六孔板，密度1*10^6个/孔，100ng/ml PMA作用24h，设立Evs和LPS，LPS+Evs作用组，作用48h。PBS冷休克和刮刀获得细胞悬液。
染了死活apc-efluor780，CD11b-PE，CD86-APC，固定，第二天上机cytoflex5检测。
目的是想看到Evs处理让CD11b和CD86双阳细胞比例减少，但是结果CD11b和CD86基本上没有染上。之前在实验室有一台国产的优利特流式检测也是没有染上怀疑是机器的问题换了新的仪器但是还是没有染上。请问各位老师，这种情况应该怎么办？右图是在免疫前沿的文章，我想以此为参考，怎么能做出这个效果，麻烦各位老师指导。

niwanmao

有没有试过染色好之后，马上上机，而不是固定后隔夜测？

soonball

niwanmao 发表于 2023-3-1 09:46
有没有试过染色好之后，马上上机，而不是固定后隔夜测？

倪老师，主要是两个指标好像一点都没有染上，就还没有再重复，希望找到问题再重复优化实验

niwanmao

soonball 发表于 2023-3-2 14:49
倪老师，主要是两个指标好像一点都没有染上，就还没有再重复，希望找到问题再重复优化实验 ...

如果都是过夜才测，还是需要小心时间过长导致的荧光淬灭的。因为你要做的这几个标记本身就比较弱。

soonball

niwanmao 发表于 2023-3-2 16:52
如果都是过夜才测，还是需要小心时间过长导致的荧光淬灭的。因为你要做的这几个标记本身就比较弱。 ...

好的，感谢倪老师，我去重复然后再看看效果。

soonball

我目前计划apc-efluor780染死活，CD86-APC，CD11b-PE或CD80-PE，CD38-PE/CY7来标记M1型巨噬细胞，CD86-APC，CD11c-FITC，CD163-PE标记M2型巨噬细胞，倪老师您看这样可行吗

niwanmao

soonball 发表于 2023-3-3 09:16
我目前计划apc-efluor780染死活，CD86-APC，CD11b-PE或CD80-PE，CD38-PE/CY7来标记M1型巨噬细胞，CD86-APC ...

可以试试吧。如果经费允许的话，可多加1~2个相关标记，可更精准一些。