一抗二抗间标问题

田先生

本人在做关于BCMA靶点的科研实验，用到了acrobiosystems生产的Biotinylated Recombinant Protein L一抗和Streptavidin二抗，标本类型是外周血，按照先标记无荧光的一抗Protein L和直标抗体CD3、CD4、CD8等加外周血样本，一起混匀进行4°孵育20min,2000转离心3min后去上清，后加入Streptavidin二抗同样4°孵育20min，离心去上清，重悬上机，整个实验流程做下来，通过间标管和直标管的图形对比差别很大，FSC-SSC细胞分群很奇怪，其他图形细胞本底很高，请教懂的老师能解惑一下，不胜感激

niwanmao

中性粒细胞和单核细胞的二抗信号特别明显，先试试Fc阻断后，再做染色。

然后，间标的染色顺序做一下调整，先染一抗Protein L，洗涤后再染二抗，再洗涤后染3、4、8等直标抗体。

田先生

niwanmao 发表于 2023-3-1 14:46
中性粒细胞和单核细胞的二抗信号特别明显，先试试Fc阻断后，再做染色。

然后，间标的染色顺序做一下调整， ...

我们目前有eBioscience Normal Rat Serum，是大鼠血清，还有新生牛血清， 这两种是否可以做阻断剂？另外，含固定剂的溶血素是否会对实验有影响？

马儿跑

田先生 发表于 2023-3-1 14:58
我们目前有eBioscience Normal Rat Serum，是大鼠血清，还有新生牛血清， 这两种是否可以做阻断剂？另外 ...

期待倪老师的答复，我也遇到了同样的问题~~

niwanmao

田先生 发表于 2023-3-1 14:58
我们目前有eBioscience Normal Rat Serum，是大鼠血清，还有新生牛血清， 这两种是否可以做阻断剂？另外 ...

血清阻断效果很差的。含固定剂的溶血素，会使荧光变化。

田先生

niwanmao 发表于 2023-3-6 20:04
血清阻断效果很差的。含固定剂的溶血素，会使荧光变化。

那用什么类型的阻断剂比较合适，目前用了一点大鼠血清，二抗阻断的效果确实不大好。

niwanmao

田先生 发表于 2023-3-7 10:14
那用什么类型的阻断剂比较合适，目前用了一点大鼠血清，二抗阻断的效果确实不大好。 ...

大鼠有fc block，就是 purified mouse IgG 1anti-rat CD32 monoclonal antibody

田先生

niwanmao 发表于 2023-3-7 19:42
大鼠有fc block，就是 purified mouse IgG 1anti-rat CD32 monoclonal antibody

好的，谢谢老师