空白管总是有对角线细胞

今日天气不错 · 发表于 2023-3-1 22:45:23

样本来自患者外周血单个核细胞，目的是分析CD3+T细胞PD-1阳性率，结果近期检测的多个标本均出现对角线细胞（横坐标CD3-BV510，纵坐标PD-1-BV421）如图1-5，严重影响实验结果。有过以下怀疑：

①死细胞过多，但是8个通道全都占满了，没办法再染“死活细胞”，也没办法用空通道排除死细胞；
②流式仪故障：已请专业老师进行维修调整，对角线细胞依旧存在；
③Pacific blue及AmCyan补偿问题：将补偿调整到0或99，对角线细胞依旧存在，应该不是补偿问题；
④抗体问题：同时期检测的CD38-BV510与IgD-BV421同样存在对角线细胞，CD3-PE及PD-1-BV421亦存在对角线细胞，排除是抗体质量问题。
由于我们用的是定制的试剂盒，所以一共洗涤17次，如果是洗涤次数过多导致细胞死亡，我动作已经非常轻柔了，且师兄也用此试剂盒（他未染这么多抗体），未出现上述问题。真的百思不得其解，跪求各位大佬帮忙分析一下！