PBMC周期检测

ChenXinghui

0ug/ml

5ug/ml

0ug/ml

5ug/ml

人外周血PBMC培养，终浓度为5ug/ml的PHA刺激24h检测周期。镜下看细胞已经出现明显的团块，说明刺激成功，为什么流式上机分析不出S期？是流式仪分析参数有问题还是我分析错了？

wxd

从分析过程来看，FL2-A/FL2-H坐标系的图可以再放大一些，有助于看清楚细胞的分群情况。从画门方式上看，去黏连细胞画矩形门，还把所有细胞都圈起来，等于没画。从分析结果来看，楼主不是没检测到S期，是没检测到G2期细胞。从分析结果的峰状图上看，总细胞数24005个细胞中，G1期的最高峰超过一万，有些不正常。所以，可以判定楼主不会分析细胞周期结果。也不排除仪器参数设置以及实验操作方面的问题。建议楼主先上传一下原始数据，我们分析一下，看看是哪里有问题。

ChenXinghui

wxd 发表于 2023-3-11 08:45
从分析过程来看，FL2-A/FL2-H坐标系的图可以再放大一些，有助于看清楚细胞的分群情况。从画门方式上看，去 ...

是的，我确实还不会分析。还在初步摸索过程中。原始文件已经上传，麻烦老师指导！

niwanmao

ChenXinghui 发表于 2023-3-12 10:05
是的，我确实还不会分析。还在初步摸索过程中。原始文件已经上传，麻烦老师指导！ ...

假如你使用的细胞浓度和PI用量两组样本均一致，那么从PI的荧光强度上推测，5ug/ml PHA刺激管，G0/G1期和S期几乎没有了，只留下了G2/M期，细胞全线进入分裂状态。

如果5ug/ml PHA刺激管，细胞浓度低、PI用量用的比较多，则结果如你分析的那样了。

ChenXinghui

niwanmao 发表于 2023-3-13 08:42
假如你使用的细胞浓度和PI用量两组样本均一致，那么从PI的荧光强度上推测，5ug/ml PHA刺激管，G0/G1期和S ...

倪老师，两组细胞除了PHA浓度，其余所有条件都是一模一样的。我觉得是我分析出现了问题。但是不知道怎么纠正问题。

niwanmao

ChenXinghui 发表于 2023-3-13 10:16
倪老师，两组细胞除了PHA浓度，其余所有条件都是一模一样的。我觉得是我分析出现了问题。但是不知道怎么 ...

染色前，两组细胞浓度你也特地调整到了一致？不像

ChenXinghui

niwanmao 发表于 2023-3-13 16:28
染色前，两组细胞浓度你也特地调整到了一致？不像

培养的时候细胞浓度是一致的，染色也是吸取了同等体积的细胞。

niwanmao

ChenXinghui 发表于 2023-3-13 17:14
培养的时候细胞浓度是一致的，染色也是吸取了同等体积的细胞。

这是不对的，应该是染色前，吸取细胞进行计数，然后调整细胞密度一致。

一开始培养的细胞密度一致是没有用的，因为你后面用了药物，最后收集染色时，两组细胞密度会相差很大。这才是你最终细胞周期染出来的荧光强度不同的根本原因。

ChenXinghui

niwanmao 发表于 2023-3-13 21:21
这是不对的，应该是染色前，吸取细胞进行计数，然后调整细胞密度一致。

一开始培养的细胞密度一致是没有 ...

好的，谢谢吴老师。那我modif软件分析过程有啥问题吗？

niwanmao

ChenXinghui 发表于 2023-3-14 10:14
好的，谢谢吴老师。那我modif软件分析过程有啥问题吗？

1、我不姓吴。
2、Modfit的问题，就是我前面说的，缺少内参，导致细胞密度发生改变时，无法明确G0/G1期的位置。