人外周血分选CD3T细胞，测增殖

多纳泰罗豪

老师们好，有一个困惑，我是从健康志愿者外周血分离的PBMC，利用磁珠分选得到CD3，体外培养大概12天，期间补充IL-2，测了两次T细胞的Ki67，流式图分群不一样，我该信哪一次的结果。图如下：

                               
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图二的0.14是FMO，没染Ki67
第一次染色就感觉分群明显，第二次染色就感觉是连续性的。
谢谢各位老师

多纳泰罗豪

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2023-3-29 10:29

第一次的FMO怎么样？

多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2023-3-29 12:16
第一次的FMO怎么样？

还可以

多纳泰罗豪

第一次的FMO跟样本

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2023-3-29 15:06
第一次的FMO跟样本

我觉得的吧，第一次的FMO如果也参照第二次的位置画，其实第一次也是类似的表达情况，连续性的。只不过第一次群体分开来了，所以可以直接通过分群位置区分。




这样的话，就涉及到设门位置的确定了，说明FMO可能反映不了Ki67的真实分群位置，不知道做FMO的时候，有没有跟Ki67管一样，经过固定、破膜，只是最后未加Ki67抗体呢？

多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2023-3-30 07:21
我觉得的吧，第一次的FMO如果也参照第二次的位置画，其实第一次也是类似的表达情况，连续性的。只不过第 ...

老师，是同样处理的，就是只有最后一步没加抗体

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2023-3-30 11:12
老师，是同样处理的，就是只有最后一步没加抗体

如此看来，可能FMO不太行。

有没有办法用新鲜分离的样本，作为阴性对照，因为正常外周血未培养的情况下Ki67应该几乎阴性，同样固定、破膜、染色，是可以作为生物学参照。

多纳泰罗豪

niwanmao 发表于 2023-3-30 14:05
如此看来，可能FMO不太行。

有没有办法用新鲜分离的样本，作为阴性对照，因为正常外周血未培养的情况下K ...

好的 谢谢老师，我用未培养的测一下

wfjprs

您好，我想请教下你用的什么磁珠，效果怎么样？