利用流式，通过肝星状细胞分化进行纤维化评分

niwanmao

肝星状细胞（HSCs）是一种中心纤维化细胞类型，参与了慢性肝脏疾病期间的胶原蛋白积累。HCV患者的外周血淋巴细胞被HSCs吞噬并诱导其分化。本研究旨在利用流式细胞术工具对HSCs的分化进行表征。来自健康供体和患有不同程度纤维化的慢性HCV患者的NK细胞与人类HSCs系（LX2）共培养。利用流式评估了NK细胞（CD45/CD56/CD3）活化标志物（CD107a）以及INF-γ、凋亡（Annexin-V）、ROS、衰老标志物P15等，评估了肝星形细胞的α-平滑肌肌动蛋白（αSMA，作为LX2活化的标志物）

LX2单培养显示为一个大小（前向散射；FSC）、颗粒度和αSMA表达均一的细胞群。然而，在与NK细胞共培养时，HSCs根据αSMA强度和细胞大小分成了四个亚群。来自健康供体的NK细胞没有激活LX2细胞。而来自F1和F4纤维化级别HCV患者的NK细胞，在四个细胞群中的两个群中显示出CD107a和INF-γ水平升高，αSMA强度增高，并且纤维化评分与αSMA强度和NK吞噬能力呈线性相关。αSMA中等/细胞小的HSCs亚群在F4-NK细胞的作用下显示出更高的增殖能力和更高的吞噬能力，提示是一个活跃/调节性的群体。αSMA高/细胞大的亚群显示出低增殖能力和低吞噬能力，并与更高的凋亡、增加的ROS和P15强度相关，提示衰老细胞。

下图为实验的典型结果，LX2在10%胎牛血清中单培养24小时，分析其（A图）大小（前向散射；FSC）、颗粒度和（B图）αSMA表达（绿色）（αSMA强度约为1000AU）。（C）共培养的NK细胞（紫色）与LX2（绿色）的代表性散点图，根据大小（前向散射；FSC）和颗粒度显示两个细胞群。另一个门（红色）被设置为包括活细胞并排除死细胞。（D）共培养后的四个αSMA亚群，根据αSMA强度和大小不同。（E）LX-2细胞表达GFAP的典型流式细胞术直方图。来自F4评分HCV患者的代表性样本的同型对照显示为黑色，与抗GFAP-Alexa Fluor 488孵育的样本显示为彩色直方图，分析靶标的均为LX2亚群。（F）显示在每个生成的HSCs亚群上的设门策略。图中显示了门（G1至G4）。（G）显示健康供体、F1和F4评分HCV患者中每组八例患者的共培养平均值，根据不同的亚群和纤维化分期显示αSMA增加（P < 0.05）。在每个实验设置中，都使用了未染色对照和IgG同型对照。


总之，NK细胞导致HSCs的异质性分化。流式细胞术可能提供一种新颖的方法来表征HSCs与肝纤维化严重程度的关系。


信源：Amer J, Salhab A, Doron S, Morali G, Safadi R. A novel flow cytometry tool for fibrosis scoring through hepatic stellate cell differentiation. Cytometry A. 2018 Apr;93(4):427-435. doi: 10.1002/cyto.a.23202. Epub 2018 Mar 8. PMID: 29517852.