流式检测对照设置

z123456

大家好！流式新手，目前想检测ILC2，通道是FITC-lin, percep-CD45, PE-CY7-CD127, APC-CD294,想请教各位老师们几个问题：

1. 新购买的抗体，检测抗体质量，需要一一设单染管看是否染上以及摸浓度吗？
2. 已经在BD仪器上调好模板（电压及补偿），后面收标本检测时对照应如何设置？文献里有很严谨的是一一做了同型，但是实际操作中反馈说做FMO减一对于分群更有帮助。请问ISO和FMO需要都设置吗？还是只需要设置其中几管？
谢谢！

niwanmao

1、如果需要确认抗体质量，可以用全血样本，单染看看，在淋巴细胞群体上和其它细胞群上的分群性能如何。LIN需要看里面的什么抗体组成，得看其排除干扰细胞是否彻底；CD45通常不太会有问题；CD127大多只能用T细胞做为阳性参照；CD294主要表达在全血中的Th2中，可看一下T细胞是否有分群出现。

2、一般4色的话，你可以做一下CD127和CD294这两个通道的FMO。

z123456

niwanmao 发表于 2023-3-31 13:56
1、如果需要确认抗体质量，可以用全血样本，单染看看，在淋巴细胞群体上和其它细胞群上的分群性能如何。LIN ...

谢谢老师！
对于第二个问题，也就是说，对照只用作两个FMO即可，同型就不用了，是这个意思吗？
另外，我发这篇帖子是有悬赏星星的，您这边回复解决了我的问题，但是系统好像没有自动发下去，看是需要我再操作什么

niwanmao

z123456 发表于 2023-3-31 23:52
谢谢老师！
对于第二个问题，也就是说，对照只用作两个FMO即可，同型就不用了，是这个意思吗？
另外，我 ...

因为对于你要检测的ILC2，这两个CD分子最重要，并且这两个分子的分群可能没有其它好，更需要做一下FMO。

同型，一般是评估非特异性结合的，如果你检测的样本中，非特异性结合占主要，可以再加上。但实际上，找到与检测分子完全匹配的同型很难，所以在流式专业杂志中，已经用Fc Blocking替代了，只有在非专业杂志中，可能同型仍然是流行的方式。

z123456

niwanmao 发表于 2023-4-1 10:05
因为对于你要检测的ILC2，这两个CD分子最重要，并且这两个分子的分群可能没有其它好，更需要做一下FMO。
...

明白了，谢谢老师！