流式细胞术

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各位站友，我想请教一个基础的问题，如何减少流式细胞术中操作导致的细胞凋亡/死亡，样品是小鼠脾脏、淋巴结、血液细胞，怀疑是红细胞裂解液导致的死细胞群增多，但还想请教一下流式操作过程中有哪些操作容易导致细胞死亡，以及避免流式操作过程中细胞死亡的技巧和注意点，十分感谢！

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流式上机检测发现死细胞较多一般还是样品本身的问题，而非流式操作导致

wxd

组织样品应在采集后放置于培养基或者PBS中，4℃保存，所有组织采集完毕后，立刻研磨或消化。研磨时应用注射器芯软头在钢网上研磨，不要使用硬头。收集细胞时，应注意设置离心机转速不超过200g。裂红后，应注意用大体积PBS清洗，以充分去除细胞碎片。从收集组织到最后上机检测，最好从头到尾都在冰上操作，整个流程不要超过4h。

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wxd 发表于 2023-4-13 17:29
组织样品应在采集后放置于培养基或者PBS中，4℃保存，所有组织采集完毕后，立刻研磨或消化。研磨时应用注射 ...

谢谢！ 我收集细胞的离心力是300g，其他的基本跟您的一致，200g您测试后跟300g的效果差距大吗  谢谢！

wxd

组织类样品我做的不多，做的比较多的是细胞系，在做流式的时候，发现同样的细胞系，低转速的细胞碎片确实明显少于高转速。细胞群也更加明显

悠游

一般来说，组织样本取出后放在冰上临时保存，等到全部取样完毕；如果你们不培养进行体外刺激的话，可以在培养皿中加入1mL的PBS，然后用注射器针将组织划碎，机械解离，过滤网，离心，重悬即可。我记得好像是淋巴结的细胞不推荐裂红，最好染色后直接上级，注意FSC阈值设置；而且组织染色最好计数，然后染死活。