染色之后不洗有什么影响

hydwl2019

凋亡试剂盒说明书上说染色15分钟后直接上机，但平时染色完都会离心洗涤一下，不洗有什么影响

wxd

没什么影响，这个是碧云天C1062S的说明书的一部分，用于流式检测，可以直接上机。不过在实际操作中，这个试剂盒的染色体系210 μL的体积，相对于流式检测所需要的5*10^5个细胞量来说有些太小，对于一次检测需要40-50 μL的上样体积来说也太小。所以我们一般会再加400-500 μL PBS对细胞悬液进行稀释，以便对同一个样品多次检测，得到更准确的结果。其实这个稀释的过程就算是一个不彻底的清洗了。

hydwl2019

wxd 发表于 2023-4-25 08:40
没什么影响，这个是碧云天C1062S的说明书的一部分，用于流式检测，可以直接上机。不过在实际操作中，这个试 ...

平时的那些染料不洗直接上机怎样

hezeljgouc

使用PI等染料和DNA的结合并不牢固，如果洗涤的话部分染料会被洗脱下来，导致阳性细胞比例下降或者荧光强度降低，所以染色后不能进行洗涤；但是染色后应该在1 h内上样检测，因为PI有一定毒性，染色时间太长容易导致细胞死亡，PI就可以进入细胞，导致分析时死亡细胞比例升高。所以一般应该在仪器准备好后，再进行PI染色，然后不洗涤尽快上机检测。

但是在使用荧光抗体标记细胞时，必须进行洗涤，染色时间过长会导致抗体非特异性结合增加，出现假阳性信号。

hydwl2019

hezeljgouc 发表于 2023-4-25 14:16
使用PI等染料和DNA的结合并不牢固，如果洗涤的话部分染料会被洗脱下来，导致阳性细胞比例下降或者荧光强度 ...

凋亡不然PI，只染fitc需要洗吗

wmj123456

hydwl2019 发表于 2023-5-5 13:49
凋亡不然PI，只染fitc需要洗吗

凋亡实验需要染死活染料，如PI的，如果只染了Annexin V，应该是要洗，但是就不能真分析凋亡的分期了