直标抗体能否再用二抗间标

jennie1203

请教老师们一个问题，我有一个直标抗体买错了，流式仪没有那个激发波长，能否当做未标记的抗体使用，用标记的二抗来进行染色？

niwanmao

可能没人试过，很难给出明确的答复。

悠游

理论上应该可以吧；你是几色panel？如果颜色多了，在其他激光激发时，这个一抗的荧光素对其他通道影响的评估起来比较麻烦，建议还是换个；如果颜色少的话，可以试试，也是帮我们扩展视野了

jennie1203

悠游 发表于 2023-5-4 14:54
理论上应该可以吧；你是几色panel？如果颜色多了，在其他激光激发时，这个一抗的荧光素对其他通道影响的评 ...

我只有488的激发光，我买的抗体需要405激发，所以准备用488的二抗去标记看看

悠游

jennie1203 发表于 2023-5-5 14:30
我只有488的激发光，我买的抗体需要405激发，所以准备用488的二抗去标记看看 ...

那你查一下荧光光谱，看看488是完全不激发吗？不激发的话应该没什么问题吧，所以我说让你评估一下看看，做个全染和这个的FMO

jennie1203

悠游 发表于 2023-5-5 14:50
那你查一下荧光光谱，看看488是完全不激发吗？不激发的话应该没什么问题吧，所以我说让你评估一下看看，做 ...

我看了激发波长405，发射波长450，我都接收不到

悠游

jennie1203 发表于 2023-5-5 15:01
我看了激发波长405，发射波长450，我都接收不到

那都收不到信号应该还好，但是你要买个荧光二抗还不如再买荧光一抗呢。用二抗染色时间长，效率低而且误差还大