请问CFSE标记Hela细胞结果如何正确分析？

Sailor

      各位前辈大家好，我最近在研究处理后的Hela细胞增殖情况，采用的是CFSE标记法，希望结果能够看到实验组细胞随药物处理浓度的提升而延缓增殖的速率，结果就表现在同一时间段内实验组细胞分裂代数的减少。
      在查阅各位大佬的技术贴后采用3μM的浓度对3X10⁶细胞进行标记5min，孵育培养96h后对细胞进行重悬，上机检测用的是BD C6仪器，因为分峰不算明显，我不太清楚这个实验数据是否可行，我也尝试用不同软件对同一结果进行拟合，结果也大不相同，现在小白实在是不知道该怎么分析我的数据了，或者我根本就没有做好这个实验，还需要重做？求各位大佬帮我看看~
分析一：Novo FCS Express

                               
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分析二：Novo Express

                               
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第一个分析拟合出8个代数，而第二个分析却没有分代，我非常迷惑，不知道该怎么分析了，附件奉上如图上处理的这组数据，请各位大佬指点一二，感激不尽

niwanmao

从你给的数据看，确实没分出不同代。

Sailor

niwanmao 发表于 2023-5-17 16:14
从你给的数据看，确实没分出不同代。

感谢您的回复，我之前图片没贴好再贴一次，这个是FSC express做的，拟合出多代；

这个是FCS express做的，拟合出多代

这个是Novo express做的，没有拟合出代数，但是这些画圈的地方不算分峰吗？两个软件处理结果完全不同~


还有请问Hela细胞是否适合做CFSE增殖数据呢？

niwanmao

Sailor 发表于 2023-5-18 10:11
感谢您的回复，我之前图片没贴好再贴一次，这个是FSC express做的，拟合出多代；

这个是Novo express做的 ...

这个拟合属于硬行拟合，我觉得换成谁来看都不会承认。

Sailor

niwanmao 发表于 2023-5-18 21:03
这个拟合属于硬行拟合，我觉得换成谁来看都不会承认。

嗯嗯 我也觉得是有问题的，后面会重新摸索这个实验。

lhzf4war

你这个分析的不太对吧，CFSE每次增殖是荧光减半，所以分析的时候，横坐标不是应该选线性吗，用对数会导致你的数据都堆在一起了，很难区分，同时用的比较多的是使用modfit去进行分析

niwanmao

lhzf4war 发表于 2023-5-22 09:29
你这个分析的不太对吧，CFSE每次增殖是荧光减半，所以分析的时候，横坐标不是应该选线性吗，用对数会导致你 ...

那天我也试过用线性帮他看数据，似乎也分不开。

kameow

niwanmao 发表于 2023-5-22 09:45
那天我也试过用线性帮他看数据，似乎也分不开。

老师，你好。我有一个疑问想向您请教，CFSE细胞增殖检测实验的原理和方法也都仔细学习和操作过。但是最近看了一个实验数据，让我很困惑，咨询实验数据提供人后，对方坚持说试剂盒可以先增殖后再CFSE染色检测。试剂盒出售公司的技术我也咨询了，都是需要染色后再培养才能检测增殖。特此向您请教，做个评判。

说是CFSE增殖检测图

niwanmao

kameow 发表于 2023-6-12 01:22
老师，你好。我有一个疑问想向您请教，CFSE细胞增殖检测实验的原理和方法也都仔细学习和操作过。但是最近 ...

CFSE站内搜一下，有原理介绍。需要先染色。

kameow

niwanmao 发表于 2023-6-12 12:09
CFSE站内搜一下，有原理介绍。需要先染色。

谢谢老师