凋亡之数据处理

Zoravae

凋亡实验实验组和对照组是必须一次实验做完吗？
比如，第一次对照组和实验组1可以，但是实验组2忘记做了，那么，下一次可以只做实验组2吗？实验组2的十字门，光补偿调节，细胞数量，这些每次都要和之前对照组的一样吗？
一般结果用啥处理？flow jo吗？

家的感觉

不同组的样本当然要一起做了，其实每次的结果还是有区别的，其他设门等条件也要一致才行

悠游

怕麻烦，最好的方法还是全部一起做一遍。
因为每批次结果还是会有波动的（细胞状态，实验操作，试验时间，试剂状态，仪器状态都会影响），如果你实在不想做，那至少也要做对照组和实验组2，但是如果第二次对照组结果跟第一次差异较大的话，你数据解释起来也很麻烦的，所以还是推荐重新一起做一批次。

wxd

凋亡实验，不同组别最好放到一起做。如果实在要分开做，也不要只做实验组2，还要加上对照组。这样在分析结果的时候，可以通过对比不同时间对照组的差异判定实验组之间的差异是否可信。
分析实验结果，可以用与流式细胞仪连接的检测软件对结果进行直接分析。但是这些检测软件的侧重点一般是检测和数据的收集整理，一些复杂的功能可能没有，所以通常会用分析功能更全面的第三方软件。我们用的最多的分析软件是FlowJo。也有一些特殊的流式结果需要用到更专业的软件，比如细胞周期结果最好用Modfit进行分析。

Zoravae

家的感觉 发表于 2023-5-18 08:45
不同组的样本当然要一起做了，其实每次的结果还是有区别的，其他设门等条件也要一致才行  ...

每一组做三次重复实验，那每一次实验中每一个样本都需要重复测三次，取平均值最后算凋亡率吗？还是每一次实验中每一个样本仅需测一次？

Zoravae

wxd 发表于 2023-5-18 09:28
凋亡实验，不同组别最好放到一起做。如果实在要分开做，也不要只做实验组2，还要加上对照组。这样在分析结 ...

好的，谢谢。还有一个疑问：每一组做三次重复实验，那每一次实验中每一个样本都需要重复测三次，取平均值最后算凋亡率吗？还是每一次实验中每一个样本仅需测一次？

家的感觉

Zoravae 发表于 2023-5-18 11:15
每一组做三次重复实验，那每一次实验中每一个样本都需要重复测三次，取平均值最后算凋亡率吗？还是每一次 ...

每次每组要重复，不然不同时间的结果会有差异

Zoravae

家的感觉 发表于 2023-5-18 11:28
每次每组要重复，不然不同时间的结果会有差异

细胞重悬在1x的binding中多久，细胞活性就不行了，不能再染PI和FITC染料?

家的感觉

Zoravae 发表于 2023-5-18 11:43
细胞重悬在1x的binding中多久，细胞活性就不行了，不能再染PI和FITC染料?

具体多久不好说，肯定最好现做现测，参考说明书应该没问题

wxd

我们的经验是：不管说明书上怎么写，细胞凋亡染色，一律先染Annexin V，上机前三分钟染色PI。原因是Annexin V染色对细胞活性基本没有影响，但是PI有毒，染色后即使细胞在冰上放置，30分钟后的检测误差也会很大，因此对于样品比较多的实验项目，我们是一个一个染色的。另外我们做流式检测，基本不会让细胞在冰上超过两个小时还没检测完毕。如果是对细胞活性要求比较高的实验，我们会往buffer里加2%体积分数的血清。