Dsred用ECD还是PE通道检测？

wmj123456

细胞转染了Dsred蛋白，它的最大激发光谱是554nm，最大发射光谱是586nm。使用的仪器有ECD(620/30)和PE（575/25）通道，下面这张图分别选择了ECD/ssc和PE/SSC，在ECD/SSC中，橙色的细胞是Dsred阳性，部分在PE/ssc的阳性信号里呈现。选择哪个通道好一些？通过调节PE的电压，有没有可能使阴阳性细胞分群明显了？另外，有见别人用PECY5检测Dsred的，查了他俩的光谱信息，离的比较远，这个通道应该不合适吧？

niwanmao

从效果看，应该还是得ECD通道了。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-5-22 21:16
从效果看，应该还是得ECD通道了。

感谢倪老师这么晚还解答我们的问题，是的，也是感觉ECD好一些，本来是考虑PE的电压没有调，如果增大电压，不知道效果是否会好一些。对了，倪老师，这是同时转染EGFP和Dsred荧光蛋白的细胞，第三和第四张图，用的H和A，差别有点明显。用H就感觉细胞断断续续的，A就比较连贯了，这个请教下您是要怎么解释？

wmj123456

wmj123456 发表于 2023-5-22 22:07
感谢倪老师这么晚还解答我们的问题，是的，也是感觉ECD好一些，本来是考虑PE的电压没有调，如果增大电压 ...

倪老师，我再补充一张图，选择A之后，断断续续的情况好像没有了，但是选择双指数的时候，负轴有一群EGFP阳性的细胞，是因为它的荧光太强的原因吗？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-5-22 22:07
感谢倪老师这么晚还解答我们的问题，是的，也是感觉ECD好一些，本来是考虑PE的电压没有调，如果增大电压 ...

A和H，不同的仪器，性能不同，有些仪器A好，有些仪器H好，主要看最后呈现出的分群效果，哪个好选哪个。

从这里看，A相对好看一些，至于ECD负值区域的信号，是ECD-FITC过度补偿了吧

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-5-23 07:40
A和H，不同的仪器，性能不同，有些仪器A好，有些仪器H好，主要看最后呈现出的分群效果，哪个好选哪个。

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倪老师，我也觉得是补偿的问题，又把他俩重新调了一下，但是总是达不到横平竖直的状态，而且右上角细胞上扬，会不会是本身细胞的问题？这个细胞同时转染了EGFP和Dsred

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-5-23 08:17
倪老师，我也觉得是补偿的问题，又把他俩重新调了一下，但是总是达不到横平竖直的状态，而且右上角细胞上 ...

这已经是调到位的状态了。