flowjo微调补偿

Ren

请问各位老师，下图是flowjo微调补偿的界面，样本在BD的机子上已经自动调过补偿，我又微微动了一下，总体上看倒是基本横平竖直，但是部分位置感觉不太理想，另外圈门图里红线圈出的部分感觉是不是补偿的问题（倾斜的太厉害）。

niwanmao

论坛建立开始，时不时会有站友发出类似不合格的图，就是坐标不标识抗原名称。这对于回答问题、讨论问题，影响蛮大的。

如果正常情况下不应该出现如此之强的信号，则可考虑非特异性；如果正常情况下应该有一群APC-cy7单阳的，则需继续调节补偿。

Ren

niwanmao 发表于 2023-5-23 07:42
论坛建立开始，时不时会有站友发出类似不合格的图，就是坐标不标识抗原名称。这对于回答问题、讨论问题，影 ...

对不起倪老师，我刚刚接触流式，以后一定注意。APC-CY7是CD127，FITC是lineage（CD3、B220、CD11b、Gr1、CD11c），APC-cy7应该是有单阳的群的，我们想要的就是APC-CY7单阳的，感谢倪老师

wmj123456

Ren 发表于 2023-5-23 10:38
对不起倪老师，我刚刚接触流式，以后一定注意。APC-CY7是CD127，FITC是lineage（CD3、B220、CD11b、Gr1、 ...

单从FITC和APCCY7的流式图看，红框那一群像是非特异性的，加大FITC-APCCY7的补偿看看。有去粘连或者加死活染料吗？

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-5-23 07:42
论坛建立开始，时不时会有站友发出类似不合格的图，就是坐标不标识抗原名称。这对于回答问题、讨论问题，影 ...

倪老师，有关这个问题，跟您请教下，我最近有遇到一个情况，不太清楚指标是否有阳性，也不太清楚是否有共表达，这种情况下，细胞还不一定是横平竖直，那要怎么客观判断补偿是不是调好了呀？

Ren

wmj123456 发表于 2023-5-24 08:20
单从FITC和APCCY7的流式图看，红框那一群像是非特异性的，加大FITC-APCCY7的补偿看看。有去粘连或者加死 ...

有去粘连，没染死活，加大了补偿调整APC-CY7阴阳性中心大致相等后，Q1左侧有部分细胞压边了，另外Q2的双阳向上的群基本没变，我把补偿调到很高它才略微有点变化且此时其他地方已经完全变形了，另外在FITC和其他部分荧光素也出现了这个情况，请问老师这种是非特异性染色嘛？能否通过需要多洗几遍来去除这个群？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-5-24 08:22
倪老师，有关这个问题，跟您请教下，我最近有遇到一个情况，不太清楚指标是否有阳性，也不太清楚是否有共 ...

横平竖直，指的是阳性群和阴性群的荧光强度中位数，而不是上和下边界。

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-5-28 08:50
横平竖直，指的是阳性群和阴性群的荧光强度中位数，而不是上和下边界。 ...

倪老师，您说的而不是上和下边界，我没有太理解是什么意思？如果是在单染管里面，我会通过看阴性和阳性细胞的横平竖直来判断补偿是否调节到位，如果更加客观的话，看median在纵坐标轴上是否接近。
但是在全染管里，看两个指标的补偿情况，此时这两个指标单独染都是有阳性了，可能4个象限都会有细胞，尤其是单阳和双阳的细胞，就不知道怎么样是补偿调节好的状态。是不是也可以看单阳和双阳细胞在纵轴上的median？或者还有哪种客观的方式来判断补偿调节好了？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-5-28 22:53
倪老师，您说的而不是上和下边界，我没有太理解是什么意思？如果是在单染管里面，我会通过看阴性和阳性细 ...

单阳群体和阴性群体的Median