B细胞分泌的IL-10

lyyda · 发表于 2023-5-24 16:20:31

各位老师，我最近在做大鼠脾中b细胞分泌的IL-10，体外培养的细胞，先培养15h（没加什么刺激），之后用的BFA，离子霉素，PMA刺激4h检测，做了两次也做不出来IL-10的比例很低只有不到百分之0.1%，想问下各位我这个是哪里有什么问题，一起做的IFN-γ问题不是很大，都刺激起来了，破膜液用的是eb的，il-10是BD的，想问下大概是什么原因呀，谢谢各位大佬了

niwanmao · 发表于 2023-5-24 19:58:38

B细胞分泌IL10的是Breg细胞，用这个条件是否不容易刺激出来？

lyyda · 发表于 2023-5-24 20:01:44

老师那正常用什么刺激比较好啊

lyyda · 发表于 2023-5-24 20:06:55

本帖最后由 lyyda 于 2023-6-11 11:09 编辑

这是我的IL-10的图

lyyda · 发表于 2023-5-24 20:07:17

FITC-b220 ifn-pe

lyyda · 发表于 2023-5-24 20:07:55

niwanmao 发表于 2023-5-24 19:58
B细胞分泌IL10的是Breg细胞，用这个条件是否不容易刺激出来？

老师可以帮我看下吗谢谢了

niwanmao · 发表于 2023-5-25 07:54:16

lyyda 发表于 2023-5-24 20:07
老师可以帮我看下吗谢谢了

可参考下面这篇方法学文献的刺激条件
Matsushita T, Tedder TF: Identifying regulatory B cells (B10 cells) that produce IL-10. Methods Mol Biol. 2011, 677: 99-111.

lyyda · 发表于 2023-5-25 10:52:13

niwanmao 发表于 2023-5-25 07:54
可参考下面这篇方法学文献的刺激条件
Matsushita T, Tedder TF: Identifying regulatory B cells (B10 ce ...

谢谢老师

lyyda · 发表于 2023-5-25 10:52:39

lyyda 发表于 2023-5-25 10:52
谢谢老师

我看了下我没有加LPS刺激，这个会影响很大吗

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[细胞因子检测] B细胞分泌的IL-10